原白頭翁素衍生物對人肺癌A549細胞株的誘導凋亡和抗增殖作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討原白頭翁素衍生物（5-溴甲基-呋喃-2酮）對人肺癌A549細胞株的誘導凋亡和抗增殖作用及其機制，為開發(fā)抗腫瘤新中藥提供實驗依據(jù)。
　　方法：應用MTT法測定原白頭翁素衍生物對人肺癌A549細胞株的生長抑制作用；通過倒置顯微鏡、光學顯微鏡、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色熒光顯微鏡觀察腫瘤細胞凋亡的形態(tài)學變化；TUNEL法檢測細胞凋亡率；應用免疫細胞化學技術(shù)檢測藥物處理前后增殖細胞核抗原Ki-67及凋亡相關(guān)基因Bcl-

2、2、Bax的基因蛋白表達。
　　結(jié)果：MTT法檢測結(jié)果，5μg/ml-20μg/ml原白頭翁素衍生物對人肺癌A549細胞株有明顯的抑制生長的作用，且呈現(xiàn)出濃度和時間的依賴性。倒置顯微鏡觀察結(jié)果，實驗組腫瘤細胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)凝集，細胞間連接疏松，貼壁能力減弱； HE染色觀察結(jié)果，實驗組腫瘤細胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)濃縮或染色質(zhì)塊形成，有的細胞膜起泡形成凋亡小體；AO/EB熒光染色觀察結(jié)果，實驗組腫瘤細胞核染色質(zhì)呈橘紅色，

3、胞質(zhì)內(nèi)的橘紅色或橘黃色熒光消失，細胞周圍可見亮綠色的凋亡小體。TUNEL染色法檢測結(jié)果，藥物在5μg/ml-20μg/ml范圍內(nèi)均能誘導肺癌A549細胞株凋亡，腫瘤細胞凋亡率隨藥物濃度的增高而上升，表現(xiàn)出濃度依賴性關(guān)系，當藥物作用48h其AI達高峰；免疫細胞化學ki-67抗原檢測結(jié)果，ki-67陽性表達率隨藥物濃度的提高和作用時間的延長而降低，表現(xiàn)出濃度和時間的依賴性關(guān)系；凋亡相關(guān)基因表達檢測結(jié)果，實驗組Bcl-2基因蛋白陽性表達率明顯