原白頭翁素衍生物對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡作用的研究.pdf

1、目的：研究原白頭翁素衍生物（溴甲基呋喃酮）對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡作用，并探討其機(jī)制，為研發(fā)新型的抑制腫瘤中藥提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)方法培養(yǎng)人肝癌HepG-2細(xì)胞；應(yīng)用四唑鹽比色法（MTT法）檢測(cè)原白頭翁素衍生物對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞株的抗增殖及細(xì)胞毒作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)癌細(xì)胞周期的分布及藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；應(yīng)用HE染色光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡及吖啶橙/溴化乙啶雙染色熒光顯微鏡觀察藥物

2、作用前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)藥物作用前后細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Survivin、Livin、NF-κB、Bcl-2、Bax、Fas蛋白的表達(dá)情況并探討原白頭翁素衍生物對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：(1) MTT結(jié)果表明：原白頭翁素衍生物在不同濃度對(duì)人肝癌細(xì)胞有不同程度的抑制作用，并且表現(xiàn)出濃度依賴性和時(shí)間依賴性；(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果：

3、原白頭翁素衍生物5μg/ml作用于肝癌細(xì)胞24、48、72h后，可見(jiàn)典型的亞二倍體峰，且G1期細(xì)胞數(shù)量增多，說(shuō)明細(xì)胞阻滯在G0/G1期；對(duì)照組凋亡率為0.02％，藥物作用細(xì)胞后凋亡率明顯增加，與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)顯微鏡形態(tài)觀察：通過(guò)倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與對(duì)照組相比，細(xì)胞體積縮小，染色質(zhì)聚集成團(tuán)塊，貼壁不牢，易脫落；HE染色光學(xué)顯微鏡觀察：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)目減少，體積變小，胞漿深染，細(xì)胞核凝集，可見(jiàn)部分細(xì)

4、胞凋亡和壞死；AO/EB雙染色熒光顯微鏡觀察：早期凋亡的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞發(fā)出黃綠色熒光，隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)，出現(xiàn)晚期凋亡和壞死的細(xì)胞，可見(jiàn)橙紅色的細(xì)胞核及碎片；(4)免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示：對(duì)Survivin、Livin、NF-κB、Bcl-2蛋白的表達(dá)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞明顯減少；對(duì)Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax及Fas蛋白的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞明顯增加，同對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論