TTF1誘導(dǎo)肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察TTF1影響肝癌HepG-2細(xì)胞增殖的情況及其對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡的影響，并進(jìn)一步探討其可能的凋亡作用機(jī)制。
　　方法:采用MTT比色法觀察TTF1影響肝癌HepG-2細(xì)胞增殖的情況，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)TTF1對(duì)HepG-2細(xì)胞周期分布的影響，運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因bc1-2、bax及p53蛋白表達(dá)，并用Western blot技術(shù)檢測(cè)Bc1-2、Bax、P53蛋白與Caspase-3、Caspase

2、-8及Caspase-9蛋白表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:TTF1可以抑制肝癌HepG-2細(xì)胞的增殖，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，其抑制作用越明顯，可見TTF1對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞的抑制作用具有時(shí)間和濃度依賴性，當(dāng)藥物濃度為10μmol/L作用時(shí)間為48 h時(shí)，對(duì)HepG-2細(xì)胞的抑制率為47.1％，接近半數(shù)抑制濃度（IC50）；TTF1可改變細(xì)胞周期分布，10μmol/L TTF1分別作用于HepG-2細(xì)胞24 h、48 h、7

3、2 h后，G0/G1期比率分別為52.0%、59.6%、64.5%，與對(duì)照組比較，有顯著性差異，表明多數(shù)細(xì)胞阻滯在 G0/G1期；10μmol/L TTF1分別作用于HepG-2細(xì)胞24 h、48 h、72 h后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)DNA含量，可見明顯的細(xì)胞凋亡峰，凋亡率分別為6.3%、7.7%、23.8%，與對(duì)照組細(xì)胞的凋亡率比較有顯著性差異；用藥后與用藥前相比，凋亡相關(guān)基因bc1-2、bax及p53蛋白表達(dá)均有顯著性改變；其中Bc1-2

4、、P53蛋白表達(dá)顯著下降，Bax蛋白表達(dá)顯著升高；Caspase-3及Caspase-9隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物劑量的增加，酶原蛋白條帶逐漸變粗，裂解產(chǎn)物逐漸增多，表達(dá)逐漸升高，而 Caspase-8在時(shí)間不同時(shí)，隨時(shí)間變化酶原蛋白條帶變粗，裂解產(chǎn)物多，表達(dá)升高，在劑量不同時(shí)其變化不明顯。
　　結(jié)論:TTF1可以抑制肝癌HepG-2細(xì)胞的增殖，且具有時(shí)-效、量-效關(guān)系，同時(shí)可以改變細(xì)胞周期分布，并可引起肝癌 HepG-2細(xì)胞的凋亡，其