水紅花子提取物對HepG-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用的研究.pdf

1、目的：研究水紅花子提取物體外對HepG-2細(xì)胞抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用，并初步探討其作用機(jī)制。 方法：采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法，應(yīng)用MTT法檢測水紅花子提取物對HepG-2細(xì)胞的抗增殖作用及細(xì)胞毒活性；通過倒置顯微鏡、HE染色、透射電鏡(TEM)觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的改變；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析細(xì)胞周期和凋亡率，觀察水紅花子提取物對HepG-2細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用；通過免疫細(xì)胞()化學(xué)(S-P法)檢測用藥前后凋亡相關(guān)基

2、因bcl-2、p53蛋白表達(dá)的改變，初步探討水紅花子提取物在體外對HepG-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用的可能機(jī)制。 結(jié)果：(1)MTT比色法結(jié)果表明，水紅花子提取物在體外對HepG-2細(xì)胞有明顯的抑制作用，且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性；(2)形態(tài)學(xué)觀察：倒置顯微鏡、透射電鏡及HE染色結(jié)果表明，水紅花子提取物作用于腫瘤細(xì)胞后，可誘導(dǎo)較典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化及超微結(jié)構(gòu)改變，如細(xì)胞胞體縮小，胞質(zhì)濃縮，微絨毛結(jié)構(gòu)減少甚至消失，胞核向外呈

3、銳角突起，染色質(zhì)高度濃縮，電子密度增高，邊集于核膜下或呈新月形，有的出現(xiàn)核固縮，核碎裂以及凋亡小體形成等；(3)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，100μg/ml水紅花子提取物體處理48h，多數(shù)細(xì)胞阻滯于S期，Go/G1和G2/M期比例明顯減少。DNA直方圖上可見G1期峰前出現(xiàn)細(xì)胞凋亡峰亞G1期峰，其凋亡率達(dá)49.71％，與對照組細(xì)胞凋亡率0.24％相比差異有顯著性(P＜0.01)；(4)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果表明，用藥前后凋亡相關(guān)基因的bcl-2、p53