Cypate-DOX-SiO2納米粒用于腫瘤診療的初步研究.pdf

1、目的：制備一種介孔二氧化硅納米粒，將其作為藥物載體并對其進行PEG修飾，以具有近紅外熒光成像和光熱效應(yīng)的藥物Cypate和具有腫瘤治療作用的化療藥物阿霉素作為模型藥物，制備一種親水性好，具有近紅外成像、光熱效應(yīng)和化療效果的多功能治療腫瘤的納米粒新型給藥系統(tǒng)。
　　方法：以十六烷基三甲基溴化銨作為模板劑，正硅酸四乙酯作為硅源，氨丙基三乙氧基硅烷作為氨基引入劑，使其在一定pH水溶液中水解縮合，制備出介孔二氧化硅納米粒。然后以介孔二氧化

2、硅作為載體，通過酰胺反應(yīng)先后將Cypate、PEG偶聯(lián)在納米粒上，再通過浸漬法將阿霉素包載到介孔二氧化硅中，制成具有多功能效應(yīng)的納米粒，研究:①利用動態(tài)光散射法、掃描電鏡、透射電鏡、氮氣吸附實驗、傅立葉轉(zhuǎn)化紅外光譜(FTIR)等多種測試方法對納米粒的粒徑、zeta電位、形態(tài)、比表面積、介孔孔徑分布、酰胺鍵以及載藥量進行了一系列表征研究。②利用紫外分光光度計法、熒光分光光度計法考察其在一定紫外和熒光范圍內(nèi)的吸收特性，考察了不同pH下Cyp

3、ate的紫外穩(wěn)定性，不同pH下DOX的熒光穩(wěn)定性，不同光照時間下納米粒的光穩(wěn)定性及升溫效應(yīng)，并在光照和非光照條件下考察了其的釋放行為。③利用DPBF熒光探針考察納米粒產(chǎn)生單線態(tài)氧的能力;通過MTT法考察了空白介孔二氧化硅納米粒、偶聯(lián)Cypate的介孔二氧化硅納米粒、單包載DOX的介孔二氧化硅納米粒以及偶聯(lián)Cypate且包載DOX的介孔二氧化硅納米粒的細胞毒性;通過紫外分光光度計法及熒光分光光度計法考察了納米粒的細胞攝取量和內(nèi)吞途徑;通過

4、DHE染色、AO染色來直觀體現(xiàn)光照激發(fā)條件下不同濃度納米粒產(chǎn)生單線態(tài)氧的變化。④將4T1細胞種入裸鼠皮下建立腫瘤動物模型，用小動物成像儀觀察多功能納米粒在裸鼠內(nèi)的組織分布及成像情況;將4T1細胞種入小白鼠皮下，將其作為腫瘤模型，用熒光分光光度計法測定Cypate在小鼠體內(nèi)的分布情況，采用高效液相色譜法測定DOX在小鼠體內(nèi)的分布。⑤將4T1細胞種入小白鼠皮下，將其作為腫瘤模型，研究不同給藥小組及光照及非光照條件下的抗腫瘤效果。
　　

5、結(jié)果：⑴制備空白介孔二氧化硅納米粒，粒徑為39.4±2.1 nm，電位為44.2±2.8mv，多分散系數(shù)為0.218、孔徑為2.6 nm及比表面積為241.5373 m2/g，經(jīng)過化學(xué)偶聯(lián)和包載制備了粒徑為44.3±1.6 nm，電位為12.7±4.8 mv，多分散系數(shù)為0.158的多功能納米粒，Cypate和DOX的載藥量分別為15％和10％。⑵經(jīng)過紫外和熒光分析方法分析，納米粒相對游離藥物具有較好的穩(wěn)定性。體外釋放研究中，納米粒粒相

6、對游離組具有明顯緩釋效果。⑶體外細胞學(xué)研究中顯示出多功能納米粒具有良好的細胞殺傷能力，其效果比單包載阿霉素和單偶聯(lián)Cypate的二氧化硅納米粒的效果好，說明包載兩種藥后具有協(xié)同作用。⑷小動物活體成像結(jié)果顯示包載兩種藥物的納米粒具有較好的靶向性和滯留效應(yīng)，而在組織分布藥物濃度測定中也顯示在腫瘤部位的濃度最高為體內(nèi)抑瘤試驗奠定了基礎(chǔ)。⑸抑瘤試驗中Cypate/SiO2可以消除腫瘤，但是腫瘤消除一段時間后容易復(fù)發(fā)，DOX@SiO2組雖可以抑制

7、腫瘤的生長，但不能消除腫瘤，而Cypate/DOX-SiO2可以抑制腫瘤生長最后消除腫瘤且不復(fù)發(fā)，顯示出獨特的治療效果。
　　結(jié)論：以自制介孔二氧化硅納米粒粒作為載體，將Cypate偶聯(lián)到其表面，再包載阿霉素后制備了兼具近紅外熒光成像、光熱治療作用和化療作用的多功能納米粒，其粒徑為44.3±1.6 nm，電位為12.7±4.8 mv，多分散系數(shù)為0.158。該納米粒具有較好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，并且具有良好的緩釋效果。在細胞試驗