GPC3mAB-SiO2-DOX載藥納米粒對(duì)荷肝癌裸鼠模型的治療效應(yīng).pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)主要探討應(yīng)用GPC3單抗介導(dǎo)阿霉素二氧化硅載藥納米(GPC3mAb-SiO2-DOX)對(duì)HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)的荷肝癌裸鼠模型的腫瘤治療效果以及該載藥納米粒是否減少對(duì)其他正常器官，如心臟、腎臟等的毒副作用。
　　方法：
　　1、制備GPC3mAb-SiO2-DOX:利用碳二亞胺(EDC)作為中間連接體，使SiO2-DOX和GPC3mAb進(jìn)行偶聯(lián)，即獲得GPC3mAb-SiO2-DOX靶向藥物;利用圓二色譜

2、儀對(duì)偶聯(lián)前后的GPC3mAb進(jìn)行表征，并使用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀法計(jì)算靶向藥物的載藥率及包封率。
　　2、建立HepG2肝癌細(xì)胞皮下移植瘤模型，當(dāng)達(dá)到成瘤標(biāo)準(zhǔn)(200mm3)后隨機(jī)分為NS組、DOX組、GPC3mAb組、SiO2-DOX組、GPC3mAb-SiO2-DOX組;治療期間，每隔一天記錄各組小鼠的體重、腫瘤體積及精神狀態(tài)，比較各組藥物的腫瘤治療效果。
　　3、第13天后，處死裸鼠取眼球血，檢測(cè)AFP、肝腎功、心肌酶譜指標(biāo)，

3、分離腫瘤、肝臟、腎臟、心臟組織。肉眼觀察腫瘤外觀，對(duì)腫瘤組織進(jìn)行免疫組化，觀察AFP及GPC3蛋白的表達(dá)。觀察腫瘤、肝臟組織病理切片，比較各組藥物的腫瘤治療效果。觀察心臟、腎臟組織病理切片，明確該靶向藥物是否對(duì)其他正常器官，如心臟、腎臟產(chǎn)生較小的毒副作用。
　　結(jié)果：
　　1、載藥納米粒GPC3mAb-SiO2-DOX的包封率及載藥量分別為42.19％和21.9％。通過(guò)圓二色譜儀進(jìn)行表征，發(fā)現(xiàn)GPC3mAb偶聯(lián)前后變化較弱，

4、表明GPC3mAb交聯(lián)到SiO2-DOX中，其自身結(jié)構(gòu)變化小，不影響其抗體活性。
　　2、成功建立荷肝癌裸鼠模型:檢測(cè)血清中AFP濃度為67.38±8.96 ng/ml，接近正常上限10倍左右;免疫組化鏡檢顯示:GPC3和AFP在腫瘤組織中均被染為棕黃色，呈陽(yáng)性表達(dá)。
　　3、載藥納米粒的治療效果:荷瘤鼠皮下腫瘤達(dá)到成瘤標(biāo)準(zhǔn)(200mm3)之前，各組裸鼠體重增加情況相近(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，GPC3mAb-SiO2-

5、DOX組體重小于NS組、GPC3mAb組，差異顯著(P＜0.05)，GPC3mAb-SiO2-DOX組體重與SiO2-DOX組、DOX組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，NS組腫瘤體積明顯增長(zhǎng)，與其他各治療組比較，差異顯著(P＜0.05)，GPC3mAb-SiO2-DOX組的腫瘤體積小于與DOX組，差異顯著(P＜0.05)，而GPC3mAb-SiO2-DOX組與SiO2-DOX組腫瘤體積相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。通過(guò)

6、觀察各組腫瘤組織病理切片，發(fā)現(xiàn)NS組有大量的腫瘤細(xì)胞存在，細(xì)胞密集，核大深染，分化程度低，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，惡性程度高;而載藥納米粒組腫瘤組織壞死組織面積大，有可辨別邊界，分化程度較好，表明載藥納米粒對(duì)皮下移植瘤具有一定的治療作用;通過(guò)觀察肝臟組織病理切片，發(fā)現(xiàn)NS組有可疑癌細(xì)胞浸潤(rùn)，而DOX組、SiO2-DOX組和GPC3mAb-SiO2-DOX組均有不同程度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，分析這三組在治療腫瘤的同時(shí)對(duì)肝臟也有不同程度損傷，而GPC3mA

7、b組肝臟組織正常，分析其對(duì)皮下腫瘤有一定的治療作用，作為一種生物制劑并不導(dǎo)致組織損傷。
　　4、毒副作用研究:觀察病理切片顯示，與對(duì)照組相比載藥納米粒組的心臟、腎臟組織均沒有明顯的組織學(xué)異常，血清學(xué)檢測(cè)腎功、心肌酶譜也發(fā)現(xiàn)載藥納米粒毒副作用較小;證明DOX通過(guò)靶向納米粒負(fù)載后，可降低化療藥物DOX的心臟、腎臟毒性，這可能與載藥納米粒中GPC3mAb特異性靶向至腫瘤有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、與對(duì)照組相比，靶向載藥納米粒