納米對比劑G250-mAb-SPIO在體外及荷人腎癌裸鼠模型中的MR靶向成像研究.pdf

1、目的：評價納米對比劑G250-mAb-SPIO在G250抗原陽性的人腎癌786-0細胞及荷人腎癌裸鼠模型中的磁共振（magnetic resonance imaging, MRI）靶向成像效果。
　　方法：在1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽[1-ethyl-3-(3-dimethyla-minopropyl) carbodiimide hydrochloride，EDC·HCl]和N-羥基丁二酰亞胺(N-Hyd-r

2、oxsuccinimide，NHS)作用下，將腎癌細胞表面特異性G250單克隆抗體(G250-monoclonal antibody, G250-mAb)通過氨基與羧基的縮合反應(yīng)連接到超順磁性氧化鐵(superparamagnetic iron oxide，SPIO)表面，得到腎癌靶向性磁共振對比劑G250-mAb-SPIO。使用相同方法，用腎癌細胞非特異性單克隆抗體人IgG與SPIO合成非特異性對比劑IgG-SPIO作為對照。分別用G

3、250-mAb-SPIO、IgG-SPIO、SPIO(納米濃度均為40μg/ml，體積500μl)及培養(yǎng)基在4℃條件下與786-0細胞孵育1h，洗滌消化后將細胞重新分散于明膠溶液中，并置于3.0 T磁共振成像儀中行T2加權(quán)成像(T2-weighted imaging, T2 WI)，并測量各組T2值的變化。
　　將786-0細胞注射到裸鼠右前肢腹側(cè)皮下，待移植瘤直徑長至8-10 mm時，隨機分為2組:對照組（SPIO組）和實驗組(

4、G250-mAb-SPIO組)各6只。將SPIO和G250-mAb-SPIO分別以相同的納米濃度、體積通過裸鼠尾靜脈注入裸鼠體內(nèi)，于注射對比劑前及注射后2h、6h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h置于3.0T磁共振成像儀中行T2WI橫軸位掃描。分析各掃描時間點移植瘤T2WI信號強度的變化。注射對比劑72 h后取實驗組裸鼠的肝臟、腎臟及肺，做HE染色，觀察納米對比劑對裸鼠實質(zhì)臟器是否有病理損害;取實驗組及對照組腫瘤組織行普

5、魯士藍染色，檢測瘤體內(nèi)有無納米顆粒沉積。
　　結(jié)果：體外細胞實驗:G250-mAb-SPIO組、IgG-SPIO組、SPIO組及對照組用于MRI T2WI成像的786-0細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。T2WI圖像上，G250-mAb-SPIO組、IgG-SPIO組、SPIO組較對照組T2信號強度減弱，T2值降低，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05); G250-MAb-SPIO組較其它組的T2值有明顯降低(P＜0.05)

6、;IgG-SPIO組與SPIO組間T2值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　裸鼠模型體內(nèi)實驗:12只荷人腎癌裸鼠模型制備成功。實驗組及對照組裸鼠經(jīng)尾靜脈注入對比劑前后，兩組組內(nèi)各時間點腫瘤瘤體T2信號強度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在同一時間點，兩組間裸鼠腫瘤瘤體T2信號強度差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗組裸鼠肝臟、肺及腎臟行HE染色均未見明顯異常病理學(xué)表現(xiàn);普魯士藍染色檢測腫瘤組織內(nèi)無藍色顆粒狀物質(zhì)。