裸鼠腎癌模型中MiR-21與PDCD4相互作用的研究.pdf

1、目的：在腎細胞癌（RCC）細胞系和組織中，microRNA-21（miR-21）下調(diào)程序性細胞死亡因子4（PDCD4）抑制細胞惡性轉(zhuǎn)化，細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。本研究的目的是探討裸鼠腎癌模型中，PDCD4和 miR-21之間的相互作用關(guān)系和角色。
　　方法：24只雄性BALB/c裸鼠隨機分為三組（陰性對照組（n=8），miR-21 inhibitor組（n=8），miR-21 mimic組（n=8））。將786-O細胞移植到小鼠腋下，每

2、天小鼠分別注射negative control siRNA，pre-mir-21（mimic）和anti-miR-21（inhibitor）。786-O細胞移植后16天，取下荷瘤小鼠的腫瘤并稱重。另外，采用實時定量RT-PCR分析腫瘤組織中miR-21和PDCD4 mRNA的表達。在腫瘤組織中PDCD4蛋白的表達，采用免疫組織化學和Western blot檢測。此外，786-O細胞分別轉(zhuǎn)染PDCD4 siRNA和negative con

3、trol siRNA，采用軟瓊脂集落形成， EDU增殖實驗和侵襲遷移實驗研究沉默 PDCD4對腫瘤細胞生長、增殖、侵襲的影響。另取16只雄性 BALB/c裸鼠隨機分為兩組：陰性對照組（ n＝8）和PDCD4 siRNA組（n=8），然后786-O細胞移植到腋下，試驗小鼠每天分別注射negative control siRNA或PDCD4 siRNA，移植后16天，取下荷瘤小鼠的腫瘤并稱重。
　　結(jié)果：與陰性對照組相比，在miR-2

4、1 mimic組腫瘤重量明顯增加，然而，在miR-21 inhibitor組腫瘤重量顯著降低。與人腎癌組織和細胞系的結(jié)果類似，在裸鼠腎癌模型中，miR-21 mimic組中 miR-21的表達與陰性對照組相比顯著上調(diào)，然而，在miR-21 inhibitor組 miR-21的表達顯著降低。此外，觀察到在miR-21 mimic組PDCD4蛋白水平顯著減少，而在miR-21 inhibitor組顯著增加，而三組腫瘤組織中 PDCD4 mR

5、NA的表達水平?jīng)]有差異。在 EDU增殖實驗中，陰性對照組（NC組）的增殖率為(28.6±2.3)％， PDCD4 siRNA組的增殖率為（44.7±3.6）%，兩組差異有統(tǒng)計學意義。在軟瓊脂集落形成實驗以及遷移和侵襲實驗中，PDCD4 siRNA轉(zhuǎn)染組細胞中克隆形成和侵襲能力顯著增加。此外，與陰性對照組相比， PDCD4 siRNA組腫瘤重量明顯增加。
　　結(jié)論：與人腎癌組織和細胞系的結(jié)果類似， miR-21在促進腎癌細胞生長、增