As-,2-O-,3-納米粒治療裸鼠肺癌移植瘤及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 1.砒霜(As<,2>O<,3>)納米粒的制備工藝及表征； 2.研究As<,2>O<,3>納米粒子體外對人肺癌A-549細(xì)胞的增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用，并與傳統(tǒng)的劑型亞砷酸(As<,2>O<,3>注射液)進(jìn)行比較； 3.研究As<,2>O<,3>納米粒體外誘導(dǎo)凋亡的分子機(jī)制； 4.As<,2>O<,3>納米粒治療異種移植性肺癌的研究。 材料方法： 1.采用溶膠-凝膠法制備系列As<,

2、2>O<,3>納米粒，用透射電鏡(transmission electron microscope，TEM)、掃描電鏡(scanning electron microscope,SEM)、能譜儀(energy dispersive spectrometer，EDS)、圖像分析系統(tǒng)(Computer color magic image analysis system CMIAS)進(jìn)行表征及特性檢測。 2.采用MTT法研究As<,2

3、>O<,3>納米粒體外對人肺癌A-549細(xì)胞的增殖抑制作用；光鏡觀察As<,2>O<,3>納米粒處理細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)改變，并與傳統(tǒng)的劑型亞砷酸(As<,2>O<,3>注射液)進(jìn)行比較；流式細(xì)胞儀測定As<,2>O<,3>納米粒及亞砷酸誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡率。 3.免疫組織化學(xué)法檢測As<,2>O<,3>納米粒及亞砷酸處理細(xì)胞后Bcl-2、Bax、CD44v6、P53基因的表達(dá)改變。 4.將As<,2>O<,3>納米粒注入到裸鼠人

4、肺癌移植瘤中，3周后測腫瘤質(zhì)量抑制率及體積抑制率，通過HE切片組織學(xué)檢查觀察治療后腫瘤組織的形態(tài)改變。 結(jié)果: 1.實(shí)驗(yàn)制備了五種不同粒徑的As<,2>O<,3>納米粒，電鏡下呈圓形或橢圓形，分散性較好，平均直徑大小約為80、110、130、150、450nm，經(jīng)能譜儀檢測證實(shí)為As<,2>O<,3>(含砷32.36％)； 2.體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：亞砷酸和As<,2>O<,3>納米粒均可對人肺癌細(xì)胞產(chǎn)生明顯的生

5、長抑制作用，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡；在相同的As<,2>O<,3>濃度及培養(yǎng)條件下，As<,2>O<,3>納米粒顯示出比亞砷酸更強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，尤其在高濃度情況下(12μmol/L)作用顯著(P<0.05)。 3.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示：中、高濃度As<,2>O<,3>納米粒的誘導(dǎo)凋亡作用(12.73％,22.62％)明顯強(qiáng)于亞砷酸(7.27％，15％)。 4.免疫組織化學(xué)顯示：亞砷酸和As<,2>O<,3>納米粒均對肺癌A-54

6、9細(xì)胞的Bcl-2基因的表達(dá)有抑制作用，對Bax基因的表達(dá)有促進(jìn)作用(Bcl-2/Bax比值降低)；兩者可明顯的抑制肺癌A-549細(xì)胞的CD44V6基因表達(dá)，促進(jìn)P53基因的表達(dá)。但在相同條件下高濃度的As<,2>O<,3>納米粒比亞砷酸對各基因的表達(dá)作用更為明顯。 5.體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)：As<,2>O<,3>納米粒的質(zhì)量抑瘤率與體積抑瘤率分別為I<,M>=51.26％和I<,v>=55.08％，高于其余各組，與對照組相比各組間均有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。各實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織有明顯壞死，而瘤旁及內(nèi)臟組織均未見明顯損傷。 結(jié)論: 采用改良的溶膠-凝膠法可將As<,2>O<,3>制備成系列的納米粒；體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)As<,2>O<,3>納米?？狗伟〢-549細(xì)胞的效應(yīng)強(qiáng)于亞砷酸溶液；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示As<,2>O<,3>納米粒能增加腫瘤的質(zhì)量及體積抑制率，導(dǎo)致腫瘤組織壞死，具有治療移植性肺癌的作用；免疫組織化學(xué)法實(shí)驗(yàn)顯示As<,2>O<,3>納米粒有較強(qiáng)的