吲哚美辛聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤的治療作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:根據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，肺癌的發(fā)病率和死亡率居全球惡性腫瘤之首。在我國，肺癌的年發(fā)病率為35/10萬人，其中80％-90％的患者為非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)。早期肺癌往往缺乏明顯癥狀，臨床確診時(shí)多已發(fā)展到晚期。因此，對(duì)肺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制及其抑制轉(zhuǎn)移藥物的研究有助于肺癌的早期診斷。
　　 腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是多基因調(diào)控的復(fù)雜過程，這些基因之間的相互作用已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。環(huán)氧化酶-2

2、(cyclooxygenase-2，COX-2)是多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵酶，在肺癌中呈過度表達(dá)，尤其在腺癌中表達(dá)明顯上調(diào)。COX-2不僅促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增生、腫瘤新生血管生成，并能抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制機(jī)體免疫功能，也可促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2，MMP-2)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中分布最廣的，能降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，EC

3、M)和基底膜，使原本均勻穩(wěn)定的基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)被破壞，為癌細(xì)胞穿出原發(fā)灶、侵入微血管和淋巴管、再突入靶器官形成轉(zhuǎn)移灶開辟了道路。
　　 CD44是人類分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，其產(chǎn)物主要有兩類，即標(biāo)準(zhǔn)型CD44s(standardform)和變異型CD44v(variantisoforms)。其中CD44v在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。CD44v6是CD44v的一種拼接變異體，其表達(dá)能改變腫瘤細(xì)胞表面黏附分子

4、的構(gòu)成與功能，從而有助于腫瘤細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移潛能。
　　 生存素(Survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins，IAP)基因家族的重要成員，是作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子。Survivin具有抑制細(xì)胞凋亡、參與細(xì)胞周期調(diào)控作用，且與腫瘤細(xì)胞的分化增殖、血管形成及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 惡性腫瘤的特征是無限增殖。增殖細(xì)胞核蛋白(Ki67)是近年來研究較多的反映腫瘤增殖活性的蛋白。Ki6

5、7的表達(dá)能可靠而迅速地反映惡性腫瘤增殖率，與腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后密切相關(guān)。
　　 吲哚美辛(Indomethacin，IN)作為非甾體抗炎藥(NSAIDs)，具有消炎、解熱鎮(zhèn)痛等作用。其對(duì)肺癌移植瘤的抑制作用及其機(jī)制國內(nèi)外報(bào)道較少，聯(lián)用應(yīng)用COX-2抑制劑是否可增強(qiáng)化療藥物的細(xì)胞毒性作用尚不明確。本研究旨在探討吲哚美辛對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤治療作用及其機(jī)制的研究和Survivin、MMP-2、CD44v6和Ki67表達(dá)的

6、影響，以探討肺癌浸潤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.將人肺癌A549細(xì)胞接種于裸鼠皮下建立移植瘤模型，隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、吲哚美辛組、奧沙利鉑組、吲哚美辛和奧沙利鉑聯(lián)合用藥組。給藥42天后，處死裸鼠，取出移植瘤組織，免疫組織化學(xué)檢測(cè)MMP-2、CD44v6和Survivin的表達(dá)，熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)腫瘤組織MMP-2、CD44v6和SurvivinmRNA的表達(dá)。
　　 2.將人肺癌A549細(xì)胞

7、接種于裸鼠皮下建立移植瘤模型，隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、吲哚美辛一組（1mg/kg/d），吲哚美辛二組（2.5mg/kg/d），吲哚美辛三組（4mg/kg/d）。給藥42天后處死裸鼠，取出移植瘤組織，免疫組織化學(xué)檢測(cè)Survivin和Ki67表達(dá)，熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)腫瘤組織Survivin和Ki67rnRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、吲哚美辛聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤治療作用的研究
　　 1.1、將

8、腫瘤細(xì)胞種植于25只裸鼠，成瘤率100％。種植后第10天，腫瘤直徑平均4mm。
　　 1.2、以圖像分析系統(tǒng)對(duì)MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白免疫組織化學(xué)染色切片進(jìn)行積分光密度測(cè)定，方差分析結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，吲哚美辛組、奧沙利鉑組及聯(lián)合組MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白表達(dá)水平均降低（分別P＜0.05）;聯(lián)合組MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白表達(dá)水平低于吲哚美辛組和奧沙利鉑組（分別

9、P＜0.05）;吲哚美辛組與奧沙利鉑組相比，MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白表達(dá)水平無差別(P＞0.05）。
　　 1.3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定MMP-2、CD44v6和SurvivinmRNA表達(dá)，方差分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，吲哚美辛組、奧沙利鉑組及聯(lián)合組MMP-2、CD44v6和SurvivinmRNA表達(dá)水平均降低（分別P＜0.05）;聯(lián)合組表達(dá)MMP-2、CD44v6和SurvivinmRNA表達(dá)水

10、平低于吲哚美辛組和奧沙利鉑組（分別P＜0.05）;吲哚美辛組與奧沙利鉑組相比，MMP-2、CD44v6和SurvivinmRNA表達(dá)水平無差別（P＞0.05）。
　　 2、不同劑量吲哚美辛對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤的治療作用及其抗增殖與凋亡的作用研究
　　 2.1、26只裸鼠成瘤，成瘤率100％，腫瘤細(xì)胞種植后第10天，腫瘤直徑平均達(dá)4mm。
　　 2.2、以圖像分析系統(tǒng)對(duì)Survivin和Ki67蛋白免疫組織化學(xué)染色切

11、片進(jìn)行積分光密度測(cè)定，方差分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，吲哚美辛各組Survivin和Ki67蛋白表達(dá)水平均明顯降低，（分別P＜0.05）;與吲哚美辛低劑量組相比，中劑量組和高劑量組Survivin和Ki67蛋白表達(dá)水平降低(P＜0.05);中劑量組和高劑量組相比，Survivin和Ki67蛋白表達(dá)水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定Survivin和Ki67mRNA表達(dá)，方差分析結(jié)果顯示，與對(duì)

12、照組相比，吲哚美辛各組Survivin和Ki67mRNA表達(dá)水平均降低（分別P＜0.05）;中劑量組與高劑量組相比，Survivin和Ki67mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、吲哚美辛單藥或聯(lián)合奧沙利鉑均能明顯抑制人肺癌裸鼠移植瘤MMP-2、CD44v6和Survivin蛋白及MMP-2、CD44v6和SurvivinmRNA的表達(dá)。兩藥聯(lián)合應(yīng)用提高了抗腫瘤及抗淋巴轉(zhuǎn)移療效。