吲哚美辛對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞成瘤裸鼠作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景: 結(jié)腸癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，確診時(shí)多屬中晚期，手術(shù)效果較差，尋找有效防治結(jié)腸癌的藥物一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。隨著對(duì)慢性炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間關(guān)系研究的深入，非甾體類抗炎藥(NSAIDs)抗結(jié)腸癌的作用備受重視。大量資料顯示長(zhǎng)期服用NSAIDs可降低結(jié)腸癌的發(fā)病率，多種NSAIDs可通過(guò)抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等產(chǎn)生抗腫瘤作用，吲哚美辛(IN)也是研究較多的此類藥物之一，但具體的分子生物學(xué)機(jī)制未完全明確。NSAIDs的抗

2、炎活性主要通過(guò)環(huán)氧合酶2(COX-2)實(shí)現(xiàn)，COX-2在結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸腺癌中表達(dá)增高，COX-2抑制劑可抑制腫瘤增長(zhǎng)，因此環(huán)氧合酶2被認(rèn)為在此過(guò)程中起關(guān)鍵作用。但COX-2并不能解釋NSAIDs抗腫瘤的全部，因?yàn)镹SAIDs對(duì)不表達(dá)CQx的癌細(xì)胞同樣可產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，不具有環(huán)氧合酶抑制活性的BSAIDs衍生物也有抗腫瘤作用，提示除環(huán)氧合酶外，NSAIDs還有其他作用靶點(diǎn)存在?，F(xiàn)有研究表明NSAIDs可通過(guò)PPARγ、PPARδ和RKS2

3、等非COX依賴性途徑發(fā)揮抗腫瘤作用。由于大腸癌的發(fā)生是一多因素多步驟的過(guò)程，涉及多個(gè)基因的突變，而NSAIDs抗結(jié)腸癌的作用涉及到大腸癌發(fā)生發(fā)展的多個(gè)環(huán)節(jié)，具體作用機(jī)制較為復(fù)雜，故常規(guī)方法很難做到全面的研究。蛋白質(zhì)組學(xué)是動(dòng)態(tài)研究一個(gè)細(xì)胞、組織或有機(jī)體中所表達(dá)全部蛋白質(zhì)的新興學(xué)科，利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究的高通量特點(diǎn)，有望發(fā)現(xiàn)藥物具體作用機(jī)制的線索及新的藥物靶標(biāo)。先前的研究己發(fā)現(xiàn)吲哚美辛可明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞成瘤裸鼠瘤組織的生長(zhǎng)，為此利用不表達(dá)C

4、OX-2的HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞接種至裸鼠皮下，以成瘤裸鼠作研究對(duì)象，用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)吲哚美辛抗結(jié)腸癌的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。 第一部分：吲哚美辛對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞裸鼠成瘤組織作用的功能蛋白質(zhì)組學(xué)分析 目的：建立吲哚美辛處理組與未處理組結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞裸鼠成瘤組織的雙向凝膠電泳圖譜，分析兩組間差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)； 方法：用雙向凝膠電泳技術(shù)分離吲哚美辛處理組與未處理組裸鼠瘤組織的總蛋白，硝酸銀及膠體考馬斯亮藍(lán)染色，

5、Image Scanner掃描儀掃描凝膠，PDQest圖像分析軟件分析比較兩組間的差異表達(dá)蛋白質(zhì)； 結(jié)論：雙向凝膠電泳圖譜的建立與優(yōu)化為研究吲哚美辛抗結(jié)腸癌作用奠定了基礎(chǔ)。差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的進(jìn)一步鑒定為揭示IN抗結(jié)腸癌作用的機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 第二部分：吲哚美辛對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞成瘤裸鼠作用的差異蛋白質(zhì)鑒定與驗(yàn)證 目的：鑒定與驗(yàn)證吲哚美辛對(duì)人結(jié)腸癌HCTll6細(xì)胞成瘤裸鼠作用的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，明確IN抗結(jié)腸癌作用的相關(guān)蛋

6、白； 方法：應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析／電離飛行時(shí)間質(zhì)譜及電噴霧質(zhì)譜分別獲得經(jīng)膠內(nèi)胰酶酶解的差異蛋白點(diǎn)的質(zhì)譜圖，用Mascot軟件查詢NCBInr和SWISS-PROT‘?dāng)?shù)據(jù)庫(kù)鑒定差異蛋白，并應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證吲哚美辛對(duì)部分所鑒定蛋白質(zhì)表達(dá)的影響； 結(jié)論：吲哚美辛對(duì)HCTll6結(jié)腸癌細(xì)胞成瘤裸鼠的作用可能與多種蛋白直接或間接相關(guān)，這些蛋白的研究有助于進(jìn)一步闡明吲哚美辛抗結(jié)腸癌作用的機(jī)制及發(fā)現(xiàn)腫瘤治療藥物的新型靶