吲哚美辛對結腸癌細胞成瘤裸鼠作用的蛋白質組學研究.pdf

1、研究背景: 結腸癌是常見的消化道腫瘤，確診時多屬中晚期，手術效果較差，尋找有效防治結腸癌的藥物一直是人們關注的熱點。隨著對慢性炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間關系研究的深入，非甾體類抗炎藥(NSAIDs)抗結腸癌的作用備受重視。大量資料顯示長期服用NSAIDs可降低結腸癌的發(fā)病率，多種NSAIDs可通過抑制細胞增殖、誘導細胞凋亡等產生抗腫瘤作用，吲哚美辛(IN)也是研究較多的此類藥物之一，但具體的分子生物學機制未完全明確。NSAIDs的抗

2、炎活性主要通過環(huán)氧合酶2(COX-2)實現，COX-2在結腸腺瘤和結腸腺癌中表達增高，COX-2抑制劑可抑制腫瘤增長，因此環(huán)氧合酶2被認為在此過程中起關鍵作用。但COX-2并不能解釋NSAIDs抗腫瘤的全部，因為NSAIDs對不表達CQx的癌細胞同樣可產生抗腫瘤效應，不具有環(huán)氧合酶抑制活性的BSAIDs衍生物也有抗腫瘤作用，提示除環(huán)氧合酶外，NSAIDs還有其他作用靶點存在。現有研究表明NSAIDs可通過PPARγ、PPARδ和RKS2

3、等非COX依賴性途徑發(fā)揮抗腫瘤作用。由于大腸癌的發(fā)生是一多因素多步驟的過程，涉及多個基因的突變，而NSAIDs抗結腸癌的作用涉及到大腸癌發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)，具體作用機制較為復雜，故常規(guī)方法很難做到全面的研究。蛋白質組學是動態(tài)研究一個細胞、組織或有機體中所表達全部蛋白質的新興學科，利用蛋白質組學研究的高通量特點，有望發(fā)現藥物具體作用機制的線索及新的藥物靶標。先前的研究己發(fā)現吲哚美辛可明顯抑制結腸癌細胞成瘤裸鼠瘤組織的生長，為此利用不表達C

4、OX-2的HCT116結腸癌細胞接種至裸鼠皮下，以成瘤裸鼠作研究對象，用蛋白質組學技術對吲哚美辛抗結腸癌的分子機制進行深入研究。 第一部分：吲哚美辛對結腸癌細胞裸鼠成瘤組織作用的功能蛋白質組學分析 目的：建立吲哚美辛處理組與未處理組結腸癌HCT116細胞裸鼠成瘤組織的雙向凝膠電泳圖譜，分析兩組間差異表達蛋白質點； 方法：用雙向凝膠電泳技術分離吲哚美辛處理組與未處理組裸鼠瘤組織的總蛋白，硝酸銀及膠體考馬斯亮藍染色，

5、Image Scanner掃描儀掃描凝膠，PDQest圖像分析軟件分析比較兩組間的差異表達蛋白質； 結論：雙向凝膠電泳圖譜的建立與優(yōu)化為研究吲哚美辛抗結腸癌作用奠定了基礎。差異蛋白質點的進一步鑒定為揭示IN抗結腸癌作用的機理提供了實驗基礎。 第二部分：吲哚美辛對結腸癌細胞成瘤裸鼠作用的差異蛋白質鑒定與驗證 目的：鑒定與驗證吲哚美辛對人結腸癌HCTll6細胞成瘤裸鼠作用的差異表達蛋白質，明確IN抗結腸癌作用的相關蛋

6、白； 方法：應用基質輔助激光解析／電離飛行時間質譜及電噴霧質譜分別獲得經膠內胰酶酶解的差異蛋白點的質譜圖，用Mascot軟件查詢NCBInr和SWISS-PROT‘數據庫鑒定差異蛋白，并應用聚合酶鏈式反應和蛋白質印跡驗證吲哚美辛對部分所鑒定蛋白質表達的影響； 結論：吲哚美辛對HCTll6結腸癌細胞成瘤裸鼠的作用可能與多種蛋白直接或間接相關，這些蛋白的研究有助于進一步闡明吲哚美辛抗結腸癌作用的機制及發(fā)現腫瘤治療藥物的新型靶