Azurin蛋白靶向工程菌對(duì)裸鼠原位結(jié)腸癌影響的研究.pdf

1、在胃腸道癌癥中，結(jié)腸癌是最常見的惡性腫瘤，傳統(tǒng)的治療結(jié)腸癌的方法在高劑量使用時(shí)能達(dá)到一定的療效，但對(duì)人體產(chǎn)生的副作用也較大，急需研究新型抗癌藥物來促進(jìn)結(jié)腸癌治療。在目前的癌癥治療和新藥研發(fā)策略中，使用細(xì)菌來消除實(shí)體腫瘤有很大的發(fā)展前景，其中大腸桿菌Nissle1917(EcN)具有腫瘤靶向性，并能在實(shí)體腫瘤中定植，通過基因修飾引入抗腫瘤藥物分子，能夠特異性地殺死腫瘤細(xì)胞而不影響其他健康細(xì)胞。EcN也是腸道益生菌，通過口服或靜脈注射，攜帶

2、治療活性藥物到達(dá)胃腸道，是治療胃腸道癌癥的較理想載體。
　　 本研究中，我們利用來源于綠膿假單胞菌中的天青蛋白(azurin)基因構(gòu)建的抗腫瘤低氧靶向工程菌E.coli Nissle1917(pET28a-Pvhb-pel-azu)(EcNVA)，分別以口服和靜脈注射方式處理，治療人結(jié)腸癌裸鼠原位移植瘤，以觀察工程菌對(duì)結(jié)腸癌的抑制效果、研究合適的給藥途徑，探索工程菌對(duì)腫瘤的抑制作用機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與PBS和E

3、cN對(duì)照組比較，EcNVA工程菌靜脈注射和口服均能有效抑制裸鼠原位結(jié)腸癌的生長，腫瘤體積減小和瘤重減輕，腫瘤抑制率達(dá)到33.7％，差異有顯著性(P＜0.05)。經(jīng)H&E染色結(jié)果顯示，EcNVA工程菌的使用使腫瘤微環(huán)境明顯改變，壞死區(qū)擴(kuò)大。經(jīng)免疫熒光和Western blotting檢測結(jié)果顯示，EcNVA工程菌azurin基因能在腫瘤內(nèi)部有效表達(dá)。熒光免疫結(jié)果表明血管密度標(biāo)志CD31、血管再生因子EGFR以及細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原Ki-67

4、表達(dá)均受抑制。細(xì)胞流式檢測結(jié)果表明，EcNVA工程菌能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，靜脈注射和口服給藥腫瘤細(xì)胞凋亡率分別達(dá)到9.59％和10.12％;通過Western blotting檢測凋亡相關(guān)蛋白，工程菌使腫瘤組織內(nèi)促凋亡蛋白p53、Bax表達(dá)上調(diào)，抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)，Caspase-3受到活化裂解產(chǎn)生p17亞基。實(shí)驗(yàn)過程中沒有觀察到工程菌對(duì)裸鼠產(chǎn)生明顯的毒副作用。
　　 結(jié)果表明，使用EcNVA低氧靶向工程菌能有效治療結(jié)