正常妊娠婦女不同孕周、妊娠期糖尿病血漿晚期氧化蛋白產(chǎn)的表達(dá)水平及臨床意義.pdf

1、研究背景：
　　 妊娠期糖尿病(GDM)是妊娠期常見(jiàn)的并發(fā)癥之一。近年來(lái)，全球GDM發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。GDM控制不良可導(dǎo)致嚴(yán)重的母體和胎兒近期及遠(yuǎn)期并發(fā)癥，因此早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療GDM顯得尤為重要。GDM的發(fā)病機(jī)制至今尚不明確。研究表明，GDM的發(fā)生與遺傳因素、營(yíng)養(yǎng)因素、炎性因子、脂肪細(xì)胞因子等有關(guān)。然而，多數(shù)研究者認(rèn)為GDM發(fā)生機(jī)制與Ⅱ型糖尿病類似，胰島素抵抗(IR)和胰島β細(xì)胞功能障礙是GDM發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。研

2、究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激在IR和胰島β細(xì)胞功能障礙中發(fā)揮了重要作用，可導(dǎo)致血糖調(diào)節(jié)機(jī)制受損，血糖水平升高。氧化應(yīng)激與GDM的關(guān)系正受到廣泛關(guān)注。
　　 在妊娠過(guò)程中，母胎血液循環(huán)剛剛建立時(shí)，胎盤內(nèi)的氧氣濃度迅速增加，此現(xiàn)象類似于缺血再灌注過(guò)程，可產(chǎn)生大量活性氧(ROS)。研究表明，正常妊娠婦女體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化作用可見(jiàn)增強(qiáng)。Ciragil等研究發(fā)現(xiàn):正常孕婦體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)及超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)水平均明

3、顯高于非孕婦女，且在無(wú)泌尿系感染的孕婦中，LPO及CAT、SOD水平從孕早期至孕晚期逐漸升高。提示正常妊娠婦女體內(nèi)氧化作用增強(qiáng)，同時(shí)伴有抗氧化物質(zhì)的增多。由于正常妊娠婦女抗氧化能力的相應(yīng)增強(qiáng)，氧化/抗氧化系統(tǒng)之間處于平衡，正常妊娠得以維持。有人認(rèn)為，妊娠期的低氧化應(yīng)激狀態(tài)對(duì)胎盤發(fā)育、絨毛形成、胎兒發(fā)育等具有重要的作用。然而，關(guān)于妊娠中晚期機(jī)體內(nèi)的氧化應(yīng)激是否增強(qiáng)，目前尚存在爭(zhēng)議。部分學(xué)者認(rèn)為，在正常妊娠中晚期，孕婦體內(nèi)的氧化應(yīng)激與非妊娠

4、婦女無(wú)明顯差異，甚至有下降趨勢(shì)。
　　 當(dāng)活性氧產(chǎn)生過(guò)多，則可能導(dǎo)致內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)消耗減少，最終導(dǎo)致氧化系統(tǒng)及抗氧化系統(tǒng)失衡，總平衡趨向于氧化作用，從而使機(jī)體處于一種氧化應(yīng)激狀態(tài)。過(guò)量的活性氧可直接或間接地引起組織、細(xì)胞損傷，造成組織、細(xì)胞功能障礙。氧化應(yīng)激與2型糖尿病的關(guān)系已明確。氧化應(yīng)激產(chǎn)生的大量活性氧可作為功能性信號(hào)分子激活細(xì)胞內(nèi)應(yīng)激敏感性信號(hào)通路，以干擾胰島素信號(hào)傳遞，造成胰島素抵抗;可直接或間接造成胰島β細(xì)胞損傷，促

5、進(jìn)胰島細(xì)胞凋亡，造成胰島素分泌減少，進(jìn)而引起血糖代謝障礙。此外，在高血糖狀態(tài)下，抗氧化酶可發(fā)生糖基化，超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等抗氧化酶活性下降，活性氧化物質(zhì)增多，亦可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧生成增加。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為糖尿病及其并發(fā)癥的產(chǎn)生可能與氧化及抗氧化系統(tǒng)失衡關(guān)系密切。另有研究顯示，氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡對(duì)細(xì)胞的損害是初始的，可能發(fā)生在高血糖出現(xiàn)之前。Brownlee等認(rèn)為，糖尿病大血管（如心血管、腦血管及下肢血管）及微血

6、管（如神經(jīng)血管）相關(guān)并發(fā)癥，有著共同的發(fā)病機(jī)制，即氧化應(yīng)激。Ceriello等曾提出“共同土壤”學(xué)說(shuō)，即氧化應(yīng)激是胰島素抵抗、糖尿病和心血管疾病的共同發(fā)病機(jī)制。GDM與2型糖尿病的病理生理機(jī)制相似。有學(xué)者對(duì)孕24-28周的23名GDM患者及22名正常妊娠婦女進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)GDM患者血漿蛋白氧化產(chǎn)物水平較正常妊娠婦女增多(P＜0.05)，抗氧化物質(zhì)對(duì)氧磷酶(PON-1)水平明顯降低(P＜0.05)。另有研究表明，與正常妊娠婦女相比，孕24

7、-29周的GDM患者血漿脂質(zhì)過(guò)氧化物水平升高，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶水平降低。提示在GDM患者體內(nèi)氧化產(chǎn)物可見(jiàn)增多（脂質(zhì)過(guò)氧化物、蛋白氧化產(chǎn)物等），而抗氧化能力減低。因此，我們推測(cè)氧化應(yīng)激可能與GDM密切相關(guān)。但目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于氧化應(yīng)激與GDM相關(guān)性的研究較少。
　　 晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)是一種新型的蛋白類氧化應(yīng)激標(biāo)志物，是氧化應(yīng)激引起體內(nèi)各種蛋白質(zhì)氧化所形成的終末產(chǎn)物的總稱。AOPP是由Witko-Sarsa

8、t等于1996年首先在慢性腎功能衰竭患者血漿中分離得出的，是含有雙酪氨酸的蛋白交聯(lián)產(chǎn)物，主要成分是血清白蛋白被自由基和反應(yīng)性氧系（主要是中性粒細(xì)胞的髓過(guò)氧化酶產(chǎn)生的氯化氧化物)氧化后的產(chǎn)物。AOPP水平在多種氧化應(yīng)激相關(guān)疾病中均可見(jiàn)增高，其可能與這些疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。研究表明，未透析患者的血漿AOPP潴留會(huì)隨腎功能的惡化而加重，終末期腎病患者的循環(huán)中AOPP含量是正常人的3倍。血管壁動(dòng)脈粥樣硬化病變部位可見(jiàn)AOPP沉積，對(duì)高膽固醇飲食

9、的兔子靜脈反復(fù)注射AOPP可促使其動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的產(chǎn)生。有學(xué)者檢測(cè)了經(jīng)冠脈造影確診的冠心病者、血液透析患者及健康志愿者血漿中的AOPP，發(fā)現(xiàn)冠心病和血液透析患者血漿AOPP都增高，而健康志愿者維持在較低水平。亦有研究表明，血漿AOPP含量跟冠心病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，提示AOPP可能是參與了冠心病的發(fā)生發(fā)展。研究認(rèn)為，AOPP可能是評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化心血管疾病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。AOPP的表達(dá)在Ⅱ型糖尿病中明顯增高，有學(xué)者認(rèn)為其可能是一種

10、評(píng)估糖尿病病人氧化應(yīng)激介導(dǎo)的蛋白損傷的有用指標(biāo)。AOPP不僅是氧化應(yīng)激的產(chǎn)物，還可引起中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的呼吸爆發(fā)，誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生更多的活性氧，正反饋誘導(dǎo)或加重氧化應(yīng)激反應(yīng)，使機(jī)體呈現(xiàn)持續(xù)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。體外實(shí)驗(yàn)中AOPP可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，加重氧化應(yīng)激程度。
　　 目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于正常孕婦及GDM患者外周血中AOPP表達(dá)水平的研究較少。本文通過(guò)觀察比較正常妊娠婦女及GDM患者不同孕周血

11、漿AOPP的表達(dá)水平，探討AOPP在正常妊娠過(guò)程中的變化規(guī)律，及其與GDM發(fā)生的相關(guān)性。
　　 研究目的：
　　 測(cè)定妊娠中晚期正常妊娠孕婦不同孕周血漿晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)的表達(dá)水平，分析AOPP隨著孕周增加的變化規(guī)律;測(cè)定妊娠期糖尿病(GDM)患者血漿中AOPP表達(dá)水平，探討AOPP與GDM發(fā)生的相關(guān)性，探索AOPP在GDM發(fā)病機(jī)制中的作用，為進(jìn)一步的研究氧化應(yīng)激在GDM發(fā)病機(jī)制中的作用提供線索。
　　

12、 研究方法：
　　 本研究為前瞻性隊(duì)列研究。選擇2012年03月至2012年11月在南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診的單胎孕婦400名，對(duì)其進(jìn)行定期產(chǎn)前檢查，并隨訪至分娩。最終隊(duì)列中完成隨訪的GDM患者24例，正常妊娠婦女168例。采用分光光度計(jì)法測(cè)定妊娠16-20周、妊娠24-28周、妊娠32-36周觀察對(duì)象血漿中的AOPP表達(dá)水平。比較正常妊娠婦女不同孕周血漿AOPP的表達(dá)水平，及正常妊娠組和GDM組血漿AOPP表達(dá)水平的

13、差異;二分類Logistic回歸分析血漿AOPP水平與GDM的相關(guān)性，確定AOPP是否為GDM發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素指標(biāo);采用雙變量相關(guān)分析，明確血漿AOPP表達(dá)水平與血糖水平、糖化血紅蛋白(HbA1c)的相關(guān)性;通過(guò)受試者工作特性曲線(ROC)分析其預(yù)測(cè)GDM的敏感性及特異性。
　　 結(jié)果：
　　 (1)正常妊娠組孕24-28周血漿AOPP表達(dá)水平顯著高于孕16-20周的表達(dá)水平，差異具有顯著性(P＜0.05);孕32-3

14、6周血漿AOPP表達(dá)水平明顯高于孕16-20周及孕24-28周的表達(dá)水平，差異具有顯著性(P＜0.05);(2) GDM組孕16-20周、孕24-28周、孕32-36周血漿AOPP水平分別顯著高于同期正常妊娠組的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);(3)二分類Logistic回歸分析顯示，AOPP是GDM發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;雙變量相關(guān)分析表明，GDM患者孕24-28周血漿AOPP水平與餐后2小時(shí)血糖水平、HbA1c水平存在顯著

15、正相關(guān)關(guān)系(p=0.000，P=0.000)。孕16-20周、孕24-28周的ROC曲線下面積分別為0.894(95％CI:0.832～0.957, P=0.000);0.826,(95％CI:0.728～0.925,P=0.000)。
　　 結(jié)論：
　　 在正常妊娠過(guò)程中，孕婦血漿AOPP水平隨著孕周的增加逐漸升高，提示孕婦體內(nèi)的氧化/抗氧化失衡可能隨著妊娠的進(jìn)展而逐漸加重。AOPP在GDM患者血漿中的表達(dá)水平明顯高于