豬偽狂犬病毒糖蛋白抗原表位的克隆及表達.pdf

1、豬偽狂犬?。╬orcine pseudorabies PR）是由偽狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的、嚴重危害我國養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要傳染病之一。該病毒屬于皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科的線性雙鏈DNA病毒，病毒DNA的G+C含量相對較高。目前已知病毒糖蛋白有11種，即必需糖蛋白和非必需糖蛋白。PRV的非必需糖蛋白編碼基因經(jīng)過缺失后構(gòu)建的基因缺失毒株，可以作為基因缺失疫苗的候選毒株；如gE缺失苗，被免疫動物不產(chǎn)生

2、gE抗體，PRV野毒株感染動物則產(chǎn)生gE抗體，通過檢測缺失基因編碼蛋白的抗體，可以判定被免疫豬群是否存在野毒感染，從而達到逐漸根除病毒和凈化豬群的目的。必需糖蛋白為病毒生長繁殖不可缺少的蛋白，因此利用gB、gD等必需糖蛋白建立病毒中和抗體的檢測方法，可有效評價疫苗的免疫效果。為此，我們開展了豬偽狂犬病毒糖蛋白抗原表位的克隆及表達。
　　本研究以臨床分離的PRV流行毒株為研究素材，通過對PRV病毒進行細胞培養(yǎng)并提取病毒基因組DNA，

3、參考Genbank中PRV糖蛋白的核酸序列，針對PRV gB、gC、gD、gE、gI基因設(shè)計出6對特異性引物；利用PCR技術(shù)擴增抗原表位的編碼序列；將擴增獲得的目的片段分別克隆于pMD-19T克隆載體及pET-28a表達載體；將構(gòu)建的重組載體進行酶切鑒定，并對插入片段進行序列測定和分析，成功構(gòu)建了pET-28-gB、pET-28-gC、pET-28-gD、pET-28-gE、pET-28-gI表達載體；分別挑取含有上述表達載體的陽性克隆