豬β防御素2抗偽狂犬病毒作用的研究.pdf

1、防御素是富含半胱氨酸的陽離子抗菌肽，它廣泛存在于各種生物中，具有廣譜的抗菌活性和一定的抗病毒作用。豬β-防御素-2（pBD-2）是豬體內(nèi)一種重要的防御素。本研究從細(xì)胞水平（in vitro）和pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠（in vivo）兩個層面上，檢測了pBD-2對偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus, PRV）的影響。研究結(jié)果如下：
　　1. pBD-2對PRV在豬腎細(xì)胞PK-15內(nèi)增殖的影響
　　體外實驗采用TCI

2、D50的方法，研究pBD-2在細(xì)胞中對PRV增殖的影響。用等量（108.5TCID50/mL）PRV Ea株與不同濃度的pBD-2（0μg/mL,8μg/mL,13μg/mL,20μg/mL and40μg/mL）作用后，再感染PK-15細(xì)胞，結(jié)果表明，pBD-2濃度為40μg/mL時可抑制PRV的增殖，說明pBD-2達(dá)到一定濃度后對PRV在PK-15細(xì)胞中的增殖有一定的抑制作用。
　　2. pBD-2基因在轉(zhuǎn)基因（TG）小鼠體內(nèi)

3、遺傳穩(wěn)定性的研究
　　為了檢測本實驗室構(gòu)建的pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠后代中pBD-2基因是否能夠遺傳和表達(dá)，通過采集小鼠后代尾尖組織，提取 DNA，利用特異性引物進(jìn)行 PCR檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)能夠檢測到pBD-2基因片段，表明pBD-2基因在小鼠體內(nèi)具有可遺傳性。選取含有pBD-2基因的小鼠，從其心、肝、脾、肺、腎和腦組織中提取RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測，結(jié)果表明 pBD-2基因在轉(zhuǎn)基因小鼠的心、肝、脾、肺、腎和腦中均能檢測到翻譯pBD

4、-2的RNA序列。
　　3. pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠對PRV在體內(nèi)增殖的抗性研究
　　為研究pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠對PRV在體內(nèi)增殖的影響，用2×103.3 TCID50的PRV腹腔感染轉(zhuǎn)基因（TG）小鼠和野生型小鼠（WT），研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠存活率比WT小鼠存活率高50％，通過病理切片發(fā)現(xiàn)TG小鼠腦和脾的組織病變比WT小鼠腦和脾的組織病變輕微，而其它組織的病變差異不顯著；利用實時熒光定量PCR對TG小鼠和WT小

5、鼠心、肝、脾、肺、腎和腦中PRV載量進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠腦和肝內(nèi) PRV載量均極顯著低于WT小鼠腦和肝內(nèi)PRV載量（p<0.01），而在其它組織的PRV載量差異不顯著（p>0.05），說明pBD-2可抑制PRV在腦和肝內(nèi)增殖。
　　4.pBD-2轉(zhuǎn)基因小鼠對自然感染PRV的載毒情況的研究
　　為了研究TG小鼠與WT小鼠自然感染PRV的組織載量的差異，將PRV人工感染TG小鼠后，與未腹腔感染TG小鼠同居，對