不同給藥途徑對鼠的潰瘍性結腸炎模型的療效比較及其機制研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：建立一種能直接將5-ASA 灌入病變部位的大鼠潰瘍性結腸炎模型。
　　 材料和方法：雄性SD 大鼠72只，隨機分為TNBS/ethanol 造模組、模型組及正常組，每組設24只大鼠。造模組及模型對照組大鼠的盲腸插入并固定一根軟管，通過大鼠的皮下穿出于頸上皮膚固定以便灌藥。距盲腸約6cm 結腸，夾閉約2cm的腸管，用1ml 注射器注入5％ 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS w／V)按100 mg／k

2、g 加入等體積的50％的乙醇造模，2min后放開。模型對照組注入等量的生理鹽水。觀察各組大鼠的糞便、精神狀態(tài)和進食情況，并每日稱體重。分別于模型誘導后1、3、7、14天后處死大鼠，對病變部位行肉眼評分，留取血清，分離結腸組織，制作病理切片，HE 染色及進行相關的分子生物學檢測結果：TNBS 造模組在造模后第1天表現(xiàn)明顯的腸道稀便和血便，持續(xù)約8天，造模后體重明顯減輕，持續(xù)8-10天緩解；造模后第3和7天可以觀察到腸壁明顯增厚、炎癥和潰瘍

3、，病理學檢查可見黏膜及黏膜下層有大量中性粒細胞及淋巴細胞、巨噬細胞、纖維細胞浸潤，14天腸道的炎性水腫消退，表現(xiàn)為大量的淋巴細胞浸潤，肉芽組織及隱窩膿腫形成。MPO（myeloperoxidase）活性值及IL-1β（interleukin-1β）、TNF-α（tumornecrosis factor）、IL-6（interleukin-6）炎癥因子在血清和病變腸組織中第1天即開始升高，第3和7天達到峰值，第14天有明顯下降。手術對照組

4、在造模后第1天部分稀便，第2天即恢復正常。正常組大鼠一切正常。
　　 結論：TNBS 誘導的大鼠潰瘍性結腸炎的模型已經(jīng)建成，其潰瘍和炎癥及相關的檢測指標表現(xiàn)為一個由急性炎癥向慢性炎癥動態(tài)變化的過程，能維持一段較長的時間，盲腸置管對造模死亡率沒有明顯影響，可直接將藥物注入大鼠盲腸，且病變范圍較穩(wěn)定，降低了個體差異性導致的模型不穩(wěn)定，可作為IBD 局部給藥治療研究的有效模型。
　　 第二部分
　　 目的：觀察并比較通

5、過置管灌注5-ASA、美沙拉嗪（艾迪沙）灌胃、5-ASA 灌胃對2，4，6-三硝基苯磺酸誘導的潰瘍性結腸炎大鼠的療效。
　　 材料和方法：70只SD 大鼠，按照隨機原則分為假手術組（A），模型組（B），5-ASA腸內(nèi)給藥組(C)，美沙拉嗪灌胃組(D)，5-ASA 灌胃組(E),每組14只，造模方法同第一部分。成模后，假手術組、模型組大鼠給與生理鹽水（2ml，2 次/天），5-ASA 腸內(nèi)給藥組及灌胃組給與5-ASA（2ml，2

6、次/天）（100mg/kg）,艾迪沙灌胃組給與艾迪沙（2ml，2 次/天）（100mg/kg）。共7天。每日記錄體重變化。用藥7天后各組大鼠進行心臟采血，留取血清，分離結腸組織，制作病理切片，HE 染色及進行相關的分子生物學檢測。
　　 結果：
　　 1.與模型組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分及組織學評分均明顯下降，且MPO 活性、免疫組化評分、組織中IL-1β、IL-6、TNF-

7、αmRNA表達及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明顯下降。5-ASA灌胃組上述指標則無明顯下降。
　　 2.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分及組織學評分均明顯下降，且MPO 活性、免疫組化評分、組織中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明顯下降。
　　 3.與艾迪沙灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥

8、組結腸黏膜大體形態(tài)學損傷評分及組織學評分均明顯下降，且MPO 活性、免疫組化評分、組織中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明顯下降。
　　 結論：腸內(nèi)直接灌注5-ASA 對2，4，6-三硝基苯磺酸誘導的大鼠潰瘍性結腸炎的治療作用強于艾迪沙灌胃及5-ASA 灌胃的治療作用。
　　 第三部分
　　 目的：應用高壓液相色譜法測定鼠的結腸、糞便及血清中5-氨基水楊酸

9、含量。
　　 方法：60只SD 大鼠，按照隨機原則分為假手術組（Sham operation），模型組（TNBS/ethanol），5-ASA 腸內(nèi)給藥組(Injecting 5-ASA by tube)，美沙拉嗪（艾迪沙）灌胃組(Oral mesalazine)，5-ASA 灌胃組(Oral 5-ASA),每組3只。使用熒光檢測器，以乙酰5-氨基水楊酸為內(nèi)標,用衍生化法使樣品中的5-ASA 乙?；V柱為Nu-cleosil

10、100-5Cl8，流動相為磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)-乙腈-四氫呋喃(85：10：5)，流速0.9 mL/min，檢測波長254 nm。用衍生化使樣品中5-ASA 乙?；?，三氯乙酸沉淀蛋白后上清液直接進樣，測定鼠的血清及結腸組織及糞便中的濃度。
　　 結果：
　　 1.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組大鼠血漿中5-ASA含量在各時間點降低；與艾迪沙灌胃組相比，5-ASA 腸內(nèi)給藥組大鼠血

11、漿中5-ASA含量在各時間點更低。
　　 2.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組大鼠結腸組織中5-ASA 含量在各時間點增高；與艾迪沙灌胃組相比，5-ASA 腸內(nèi)給藥組大鼠結腸組織中5-ASA 含量在各時間點更高。
　　 3.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組大鼠糞便中5-ASA含量在各時間點增高；與艾迪沙灌胃組相比，5-ASA 腸內(nèi)給藥組大鼠糞便中5-ASA含