甲基汞急性暴露誘導(dǎo)大鼠腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-時(shí)間及劑量效應(yīng)關(guān)系研究.pdf

1、目的：甲基汞是全球性的環(huán)境污染物,但毒性機(jī)制一直未能明了,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是機(jī)體應(yīng)答內(nèi)源性和外源性應(yīng)激的重要機(jī)制。本研究通過(guò)整體動(dòng)物染毒實(shí)驗(yàn),探討甲基汞急性暴露誘導(dǎo)大鼠不同腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的時(shí)間效應(yīng)關(guān)系,并初步探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與氧化應(yīng)激損傷的關(guān)系；在獲得的研究基礎(chǔ)上又進(jìn)一步研究了甲基汞對(duì)大鼠大腦皮層和小腦誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　 方法(一)甲基汞急性暴露誘導(dǎo)不同腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的時(shí)間-效應(yīng)研究:42只SD大鼠隨機(jī)分為7組,腹腔注

2、射4 mg／Kg氯化甲基汞,并在0.5、1、3、6、12、24 h后麻醉斷頭處死,同時(shí)設(shè)生理鹽水對(duì)照組。蛋白印跡法測(cè)定小腦、大腦皮層、腦干、海馬和紋狀體5個(gè)腦區(qū)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志性蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein78,Grp78)的表達(dá),并測(cè)定大腦皮層內(nèi)過(guò)氧化氫酶(CAT)活性和還原型谷胱甘肽(GSH)含量。(二)甲基汞急性暴露誘導(dǎo)大腦皮層和小腦的劑量-效應(yīng)關(guān)系研究:30只SD大鼠隨機(jī)分為6組,對(duì)

3、照組(等體積生理鹽水)、2mg／kg、4 mg／Kg、6 mg／Kg、8 mg／Kg、10 mg／kg氯化甲基汞,6 h后麻醉斷頭處死,蛋白印跡法測(cè)定大腦皮層和小腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性蛋白Grp78的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定大腦皮層蛋白Grp78 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果(1)蛋白印跡法結(jié)果顯示急性甲基汞染毒后,小腦、大腦皮層、腦干、海馬和紋狀體等5個(gè)腦區(qū)Grp78蛋白表達(dá)水平均顯示了先升高后降低的變化趨勢(shì)。在0.5 h

4、開(kāi)始升高,并且在6 h或12 h達(dá)到高峰,然后逐漸下降,在24 h接近空白對(duì)照組水平,其中大腦皮層與腦干Grp78蛋白的時(shí)間效應(yīng)變化與空白對(duì)照組相比分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大腦皮層在染毒6 h時(shí)處在最高峰,Grp78蛋白表達(dá)量與空白對(duì)照組相比增加約50％。腦干在染毒12 h處在最高峰,Grp78蛋白表達(dá)量比空白對(duì)照組增加約40％?？寡趸芰y(cè)定結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,大腦皮層中CAT活性呈現(xiàn)一直增高的趨勢(shì),0.5 h開(kāi)始升高,在24 h

5、達(dá)到最高。還原型GSH含量呈現(xiàn)先降低后緩慢升高的趨勢(shì),顯示與蛋白Grp78的變化正好相反的趨勢(shì)。(2)不同劑量的甲基汞染毒后,大腦皮層和小腦在Grp78蛋白表達(dá)水平都顯示了先升高后降低的趨勢(shì),在2 mg／kg即開(kāi)始升高。其中大腦皮層在6 mg／Kg達(dá)到高鋒,然后下降,8 mg／kg接近空白對(duì)照組水平,并在染毒劑量為6 mg／kg時(shí),蛋白Grp78的表達(dá)量與空白對(duì)照組相比增加約80％。在4、6、8mg／kg小腦Grp78蛋白的劑量效應(yīng)變化

6、與空白對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定結(jié)果顯示,大腦皮層在mRNA水平顯示了先升高再下降的趨勢(shì),在2 mg／Kg開(kāi)始升高,并在8 mg／kg接近高峰,然后下降,在10 mg／kg低于空白對(duì)照組水平。其中在染毒劑量為8 mg／kg時(shí),蛋白Grp78的mRNA水平與空白對(duì)照組相比增加約65％。
　　 結(jié)論(1)甲基汞急性暴露誘發(fā)腦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激具有時(shí)間效應(yīng)和腦區(qū)特異性,其中大腦皮層最為敏感,這種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激效應(yīng)可能與氧化應(yīng)