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文檔簡介
1、乳腺炎是婦女產(chǎn)褥期的高發(fā)疾病,長期危害產(chǎn)婦和新生兒的健康。導(dǎo)致乳腺炎的主要因?yàn)橹痪褪遣【那秩?。乳腺上皮?xì)胞作為防御病菌侵害的第一道屏障,發(fā)揮著首當(dāng)其沖的作用。已有研究表明,病菌侵入后,其胞內(nèi)的內(nèi)毒素釋放出來首先與乳腺上皮細(xì)胞膜表面的的TOLL樣受體家族結(jié)合,進(jìn)而激活下游通路,導(dǎo)致促炎癥因子的釋放。促炎癥因子釋放到血液中可以招募白細(xì)胞到病患部位殺滅病菌,同時(shí)促炎癥因子的大量釋放也可以引起過度炎癥反應(yīng),直接或間接造成組織和細(xì)胞的破壞。<
2、br> Caveolin-1(Cav-1,窖蛋白)是Caveolae(胞膜窖)的標(biāo)志蛋白,可以參與細(xì)胞內(nèi)的多種生命活動(dòng),如膽固醇運(yùn)輸、細(xì)胞膜的組裝、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成。本室前期工作表明Cav-1與ERa之間存在相互作用關(guān)系,Cav-1表達(dá)下調(diào)激活ERK/MAPK和PI3K/AKT信號(hào)通路,誘發(fā)乳腺細(xì)胞向癌細(xì)胞的早期轉(zhuǎn)化。新近研究表明,Cav-1可以與TOLL樣受體4(TLR4)相互作用,從而抑制炎癥反應(yīng),但其是否參與
3、細(xì)胞炎癥通路的激活過程尚不清楚。
本論文利用DNA微陣列、免疫印跡和免疫熒光等技術(shù),觀察了Cav-1與TLR4的共定位關(guān)系,以及Cav-1對(duì)人乳腺上皮細(xì)胞炎癥相關(guān)基因和炎癥反應(yīng)通路的影響,旨在探討人乳腺上皮細(xì)胞的炎癥通路機(jī)制,并探討Cav-1是否通過影響TLR4的表達(dá)和功能及其下游通路,進(jìn)而抑制LPS引起的人乳腺上皮細(xì)胞前炎癥反應(yīng)。
結(jié)果如下:1、以人乳腺上皮細(xì)胞MCF10A和利用基因捕獲技術(shù)、siRNA技術(shù)
4、建立的Cav-1低表達(dá)細(xì)胞模型MCF10ACE為研究對(duì)象,利用DNA微陣列技術(shù)比較分析了MCF10A和MCF10ACE細(xì)胞炎癥相關(guān)基因的差異,發(fā)現(xiàn)當(dāng)Cav-1基因低表達(dá)時(shí),10個(gè)炎癥相關(guān)基因上調(diào)。利用免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)在MCF10A和MCF10ACE細(xì)胞中,Cav—1與TLR4共定位在一起,并且其表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)趨勢。2、采用LPS刺激成功建立人乳腺上皮細(xì)胞前炎癥反應(yīng)模型,并且發(fā)現(xiàn)LPS刺激可以激活人乳腺上皮細(xì)胞TLR4下游的JNK和P3
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