Toll樣受體4介導BCG-LPS誘導免疫性肝損傷的機制及芍藥苷的作用.pdf

1、芍藥苷(paeoniflorin，Pae)為白芍總苷(totalglucosides0fpaeony，TGP)中的主要成分。本課題組以往的研究發(fā)現(xiàn)，TGP具有抗炎、抗氧化、免疫調節(jié)和抗肝損傷等作用。本研究采用卡介苗(BacillusCalmette．Guerin，BCG)和脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)共同誘導的急性免疫性肝損傷(immunologicalliverinjury，ILI)模型，首先從整體上考察Pa

2、e拮抗肝損傷作用，然后采用逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscriptionpolymersechainreaction，RT-PCR)分析Pae調節(jié)ILl小鼠肝組織腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)．a、白細胞介素(interleukin，IL)．6、脂多糖結合蛋白(1ipopolysaccharidebindingprotein，LBP)、分化群(cluster0fdifferentiation

3、，CD)14和TLR4mRNA水平的量效和時效關系，最后采用Western-blot和免疫組化(immunohistochemistry，IHC)分析Pae對ILl小鼠肝組織細胞胞漿蛋白IKB-a和核蛋白NFKBp65表達水平的影響，進而對Pae調節(jié)TLR4信號轉導通路的部分機制作了初步探討。 目的：研究TLR4介導BCG／LPS誘導ILI的機制；芍藥苷對小鼠ILI的作用及其調節(jié)TLR4信號轉導的部分機制。 方法：小鼠尾

4、靜脈注射BCG，12天后再次尾靜脈注射LPS誘導ILI模型；灌胃(intragastricadministration，ig)給予Pae(25，50，100mg．kg-1)12天(day，d)，聯(lián)苯雙酯(bifendate，BiD為陽性對照藥。 采用分光光度法測定血清丙氨酸氨基轉移酶(alanineaminotransferase，ALT)活性；稱重法檢測肝脾指數(shù)；放免法檢測血清TNF-a水平；采用蘇木素．伊紅(hematoxy

5、lin-eosin，HE)染色，在光學顯微鏡下觀察肝組織中炎性細胞的積聚，肝細胞的變性、壞死等病理變化，并根據(jù)病理分級標準統(tǒng)計分析；采用RT-PCR檢測肝組織TNF-a、IL-6、LBP、CDl4和TLR4mRNA的轉錄水平；IHC檢測肝組織CDl4、NFKBp65的表達水平；Westernblot方法檢測肝組織IκB-a和．NFKBp65的表達水平。 結論： LTNF-a、IL-6、TLR4、LBP和CDl4參與了IL

6、I的病理生理過程，并在其中發(fā)揮重要作用。 2．Pae能降低ILl小鼠血清和肝臟指標水平，改善肝功能，減輕肝組織病理損傷，提示Pae對ILI具有明顯的保護作用。其作用可能與下述機制有關： (1)降低血清TNF-a的水平以及肝組織TNF-amRNA的轉錄水平； (2)上調IL-6mRNA轉錄，可能與抑制TNF-a的產生密切相關； (3)下調TLR4、LBP和CDl4mRNA轉錄，從而減弱TLR4介導的信號轉導