Toll樣受體4介導(dǎo)BCG-LPS誘導(dǎo)免疫性肝損傷的機(jī)制及芍藥苷的作用.pdf

1、芍藥苷(paeoniflorin，Pae)為白芍總苷(totalglucosides0fpaeony，TGP)中的主要成分。本課題組以往的研究發(fā)現(xiàn)，TGP具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和抗肝損傷等作用。本研究采用卡介苗(BacillusCalmette．Guerin，BCG)和脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)共同誘導(dǎo)的急性免疫性肝損傷(immunologicalliverinjury，ILI)模型，首先從整體上考察Pa

2、e拮抗肝損傷作用，然后采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscriptionpolymersechainreaction，RT-PCR)分析Pae調(diào)節(jié)ILl小鼠肝組織腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)．a(chǎn)、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)．6、脂多糖結(jié)合蛋白(1ipopolysaccharidebindingprotein，LBP)、分化群(cluster0fdifferentiation

3、，CD)14和TLR4mRNA水平的量效和時(shí)效關(guān)系，最后采用Western-blot和免疫組化(immunohistochemistry，IHC)分析Pae對(duì)ILl小鼠肝組織細(xì)胞胞漿蛋白IKB-a和核蛋白NFKBp65表達(dá)水平的影響，進(jìn)而對(duì)Pae調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的部分機(jī)制作了初步探討。 目的：研究TLR4介導(dǎo)BCG／LPS誘導(dǎo)ILI的機(jī)制；芍藥苷對(duì)小鼠ILI的作用及其調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的部分機(jī)制。 方法：小鼠尾

4、靜脈注射BCG，12天后再次尾靜脈注射LPS誘導(dǎo)ILI模型；灌胃(intragastricadministration，ig)給予Pae(25，50，100mg．kg-1)12天(day，d)，聯(lián)苯雙酯(bifendate，BiD為陽(yáng)性對(duì)照藥。 采用分光光度法測(cè)定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase，ALT)活性；稱重法檢測(cè)肝脾指數(shù)；放免法檢測(cè)血清TNF-a水平；采用蘇木素．伊紅(hematoxy

5、lin-eosin，HE)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織中炎性細(xì)胞的積聚，肝細(xì)胞的變性、壞死等病理變化，并根據(jù)病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)分析；采用RT-PCR檢測(cè)肝組織TNF-a、IL-6、LBP、CDl4和TLR4mRNA的轉(zhuǎn)錄水平；IHC檢測(cè)肝組織CDl4、NFKBp65的表達(dá)水平；Westernblot方法檢測(cè)肝組織IκB-a和．NFKBp65的表達(dá)水平。 結(jié)論： LTNF-a、IL-6、TLR4、LBP和CDl4參與了IL

6、I的病理生理過(guò)程，并在其中發(fā)揮重要作用。 2．Pae能降低ILl小鼠血清和肝臟指標(biāo)水平，改善肝功能，減輕肝組織病理?yè)p傷，提示Pae對(duì)ILI具有明顯的保護(hù)作用。其作用可能與下述機(jī)制有關(guān)： (1)降低血清TNF-a的水平以及肝組織TNF-amRNA的轉(zhuǎn)錄水平； (2)上調(diào)IL-6mRNA轉(zhuǎn)錄，可能與抑制TNF-a的產(chǎn)生密切相關(guān)； (3)下調(diào)TLR4、LBP和CDl4mRNA轉(zhuǎn)錄，從而減弱TLR4介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)