單鏈抗體融合人血白蛋白對(duì)重癥肌無(wú)力致病性抗乙酰膽堿受體抗體的抑制.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：研究單鏈抗體融合人血白蛋白(HSA-ScFv)在體外對(duì)重癥肌無(wú)力(MG)的治療作用。
　　方法：將攜帶有高拷貝重組基因表達(dá)載體的畢赤酵母菌GS115菌株復(fù)蘇后，用YPD培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，再經(jīng)BMGY、BMMY表達(dá)培養(yǎng)基培養(yǎng)3天，每24小時(shí)添加100％甲醇使甲醇終濃度為1%誘導(dǎo)表達(dá)。培養(yǎng)基上清液室溫經(jīng)14000 g離心后，利用斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)（dotblot）初步判定上清液中的融合蛋白；采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS

2、-PAGE）分析融合蛋白的分子量；蛋白印跡（western blot）實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定表達(dá)蛋白的特異性；應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)性ELISA測(cè)定法對(duì)HSA-ScFv抑制MG患者血清與人乙酰膽堿受體(AChR)結(jié)合率及表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：HSA-ScFv637對(duì)MG患者血清與人AChR結(jié)合的抑制率可達(dá)77.4﹪，其對(duì)AChR的這種保護(hù)能力可持續(xù)3天，隨著樣品的衰變HSA-ScFv637保護(hù)作用減弱至消失。
　　結(jié)論：HSA-Sc

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