牛血血紅蛋白酶法水解及產(chǎn)物抗氧化活性的研究.pdf

1、我國動物血液資源豐富，如不加以合理開發(fā)利用，直接排放到環(huán)境中，不僅浪費了寶貴的蛋白質(zhì)資源，而且對環(huán)境造成嚴重的污染。血紅蛋白作為血液中的最主要蛋白質(zhì)，由于其色澤猩紅、腥味重、不易保藏以及被人體消化吸收，而難以開發(fā)利用。利用現(xiàn)代高新技術(shù)開發(fā)高附加值產(chǎn)品，進一步提高動物血液的利用率，對動物血液制品的工業(yè)化和生態(tài)環(huán)境的保護具有重要的意義。本研究以牛血血紅蛋白為研究對象，研究中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、木瓜復合蛋白酶、Protamex蛋白酶、Fla

2、vourzyme蛋白酶單酶體系對血紅蛋白的酶水解作用，并采用內(nèi)切酶和外切酶分步酶解方法，確定水解血紅蛋白的最佳條件，通過測定水解度、蛋白質(zhì)回收率、氨基氮含量、TCA可溶性氮含量、血紅素含量等指標，確定最佳的酶解工藝條件，為血紅蛋白制品的開發(fā)和工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。并利用體外抗氧化活性測定方法對酶解產(chǎn)物的抗氧化活性進行檢測，探索利用動物血液血紅蛋白提取抗氧化肽的可行性，為動物血液制品的開發(fā)利用探索新的道路。實驗結(jié)果表明，對牛血血紅蛋白進

3、行酶法水解，以水解度(DH)和TCA可溶性氮含量為指標，中性蛋白酶水解效果最好；以蛋白回收率、血紅素含量作為衡量指標，木瓜復合蛋白酶效果最好。通過單因素水平試驗和正交實驗，確定了中性蛋白酶的最佳水解條件、中性蛋白酶和風味蛋白酶的雙酶復合酶解最佳工藝和木瓜復合蛋白酶分段升溫酶解最佳工藝。實驗證明采用雙酶復合酶解血紅蛋白效果明顯好于單酶酶解，水解液的水解度、蛋白質(zhì)回收率、氨基氮含量、TCA可溶性氮含量都有所增加，水解度可達到52.9％，比單

4、酶水解提高了55％，水解液中TCA可溶性氮含量為70.6％。 通過SDS-PAGE電泳研究血紅蛋白酶解產(chǎn)物的分子量分布，探討酶的種類，水解方式對酶解產(chǎn)物分子量分布的影響。結(jié)果顯示，雙酶分步酶解所得水解液中多肽平均分子量明顯小于單酶水解液，單酶水解液中多肽分子量集中在3000～8000Da，雙酶復合水解液中大部分多肽分子量低于6000Da，部分多肽分子量在3000Da以下。 本研究采用熒光光度法檢測了酶解產(chǎn)物抗氧化活性，發(fā)