菜籽蛋白酶水解及水解物的生物活性研究.pdf

1、目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)酶解菜籽蛋白開(kāi)發(fā)活性肽的研究報(bào)道，大多使用單一酶，對(duì)于使用雙酶組合水解菜籽蛋白及水解物的抗氧化活性的研究報(bào)道相對(duì)較少。本文以雙低菜籽為原料，對(duì)菜籽蛋白用雙酶組合進(jìn)行水解，研究菜籽蛋白水解物的抗氧化活性，選出抗氧化活性較好的酶水解物進(jìn)一步分離純化，再確定抗氧化活性較高的菜籽多肽的分子量范圍。此外，對(duì)不同水解度的菜籽多肽抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的活性也進(jìn)行了研究，并與降壓藥卡托普利抑制ACE的活性進(jìn)行相應(yīng)比較，為開(kāi)發(fā)具有

2、抗氧化活性和降血壓功能的菜籽蛋白水解物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　 本文通過(guò)分別使用Alcalase單酶和Alcalase與Flavourzyme雙酶結(jié)合相繼水解菜籽蛋白，并對(duì)水解物的抗氧化活性進(jìn)行研究，確定菜籽蛋白水解物清除DPPH自由基能力和還原能力與酶的種類(lèi)和水解度有關(guān)，其中經(jīng)雙酶相繼水解得到的水解物的還原能力和清除DPPH自由基的能力都大于單酶水解物，同時(shí)菜籽蛋白水解物的抗氧化能力還與其濃度有關(guān)，在一定濃度范圍內(nèi)提高蛋

3、白水解物濃度可相應(yīng)提高抗氧化能力。通過(guò)研究Na2SO3對(duì)中性蛋白酶、木瓜蛋白酶以及Flavourzyme水解菜籽蛋白的速率的影響，發(fā)現(xiàn)Na2SO3能明顯提高中性蛋白酶的水解速率和水解度，且Na2SO3對(duì)其的影響明顯大于對(duì)木瓜蛋白酶和Flavourzyme的影響，所以本文以中性蛋白酶水解菜籽蛋白，研究Na2SO3對(duì)其水解物的抗氧化性能的影響，包括對(duì)于水解物清除DPPH自由基活性、還原能力以及抑制亞油酸氧化活性的影響，確定使用Na2SO3對(duì)

4、菜籽蛋白進(jìn)行前處理，可增加中性蛋白酶對(duì)菜籽蛋白的水解速率，并能增強(qiáng)水解物清除DPPH自由基活性、但降低水解物還原能力和抑制亞油酸氧化活性。使用中性蛋白酶分別與Alcalase、Protamex、Flavourzyme、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶相結(jié)合，用雙酶相繼水解菜籽粕，得到五組菜籽粕的雙酶水解物，通過(guò)對(duì)相應(yīng)水解物抗氧化活性的研究，確定所有水解物都具有一定清除DPPH自由基活性、還原能力和抑制亞油酸氧化活性，但以中性蛋白酶和胰蛋白酶組合的水

5、解物的活性最強(qiáng)。
　　 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)對(duì)中性蛋白酶和胰蛋白酶結(jié)合的水解物作進(jìn)一步研究。經(jīng)依次使用pellicon膜和Sephadex G-25凝膠柱分離后，得到四部分分子量不同的菜籽蛋白水解物，其中以分子量為6500Da－1050Da范圍的水解物清除DPPH自由基的活性最高，表明菜籽粕雙酶水解物的抗氧化活性取決于水解物的分子結(jié)構(gòu)，即不僅與酶的種類(lèi)有關(guān)，還與水解條件和水解度有關(guān)。使用堿性蛋白酶(Alcalase2.4L)水