解淀粉芽孢桿菌PEBA20異質(zhì)性變異特征及degS基因突變株的初步構(gòu)建.pdf

1、本研究跟蹤了解淀粉芽孢桿菌PEBA20持續(xù)繼代培養(yǎng)條件下的生物膜表型與抗真菌活性，檢測(cè)了典型變異株的生物膜形成與抗菌活性;確定了變異株SCEV與野生株在生物膜形成、抗菌活性以及二者相關(guān)基因表達(dá)水平方面的差異。初步構(gòu)建了degS基因的缺失突變株。主要研究結(jié)果如下:
　　1.在單一環(huán)境持續(xù)繼代培養(yǎng)條件下，PEBA20生物膜表型產(chǎn)生了變異，這種變異具有明顯的異質(zhì)性特征。PEBA20在整個(gè)繼代過程中產(chǎn)生了20種生物膜表型，生物膜表型組成的

2、Shannon指數(shù)隨著繼代次數(shù)的增加呈遞減趨勢(shì)。在繼代過程前期，豐富度指數(shù)維持較高水平，均勻度指數(shù)維持較低水平。在繼代后期，三種多樣性指數(shù)保持相對(duì)穩(wěn)定，PEBA20形成多樣性低、變異幅度小的穩(wěn)態(tài)株系。
　　2.持續(xù)繼代培養(yǎng)過程中，PEBA20抗真菌活性隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移產(chǎn)生變化。PEBA20對(duì)蘋果腐爛病菌（Valsa mali）和楊樹潰瘍病菌（Botryosphaeria dothidea）菌落生長(zhǎng)的抑制率呈現(xiàn)了“高-低-高-低”

3、的變化過程。與出發(fā)株相比，穩(wěn)態(tài)株系對(duì)兩種指示真菌的抗菌活性顯著降低。
　　3.五種典型變異株在生物膜形成方面有明顯差異，且具有不同的抗菌活性。五種典型變異株的生物膜形成在大小、邊緣特征、表面特征三個(gè)方面顯著不同，最終形成的生物膜結(jié)構(gòu)明顯不同。典型變異株發(fā)酵液對(duì)指示真菌（V.mali、B.dothidea、Bipolaris maydis）和兩種指示細(xì)菌（Clavibacter michiganense和Ralstonia sola

4、nacearum）的抗菌活性明顯不同。
　　4.變異株SCEV的生物膜表型可穩(wěn)定遺傳。與野生株相比，變異株SCEV不能形成復(fù)雜的生物膜結(jié)構(gòu)、抗真菌活性降低、抗細(xì)菌活性升高。變異株SCEV生物膜形成、抗菌活性相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果表明，變異株SCEV tasA、epsA、srfAD、bmyA、fenA、dfnA、baeD基因的表達(dá)量分別是野生株的0.02倍、1.68倍、0.41倍、0.23倍、0.50倍、4.42倍，1.43倍。