交感神經(jīng)調(diào)控Kupffer細(xì)胞活化促進(jìn)肝癌形成及其機(jī)制研究.pdf

1、一、背景:
　　肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,但肝癌的發(fā)病機(jī)制至今仍不完全清楚。70-90％的肝癌患者發(fā)病大多有長期慢性乙型病毒性肝炎病史,表現(xiàn)為經(jīng)典的“乙肝-肝硬化-肝癌”的三步曲模式。肝硬化狀態(tài)被認(rèn)為是肝癌的癌前病變,且臨床診治的肝癌患者大多已處于肝硬化代償或失代償期,而在肝硬化基礎(chǔ)上如何發(fā)生發(fā)展成為肝癌這一具體機(jī)制尚不完全清楚,因此十分有必要對這一疾病狀態(tài)下的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入探討,從而為臨床肝癌的診治提供新的思路和手段。<

2、br>　　部分研究已證實交感神經(jīng)對腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要調(diào)控作用。Tatsuta M的研究表明在實驗性大鼠結(jié)腸癌模型中,通過6-OHDA(六羥基多巴胺)對大鼠進(jìn)行化學(xué)性交感神經(jīng)去除后,可以顯著地降低結(jié)腸癌的發(fā)生率以及減少腫瘤的數(shù)量,明確了交感神經(jīng)系統(tǒng)對結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用;此外,在大鼠胃癌誘導(dǎo)過程中,通過刺激腎上腺素α1受體介導(dǎo)腎上腺素能受體明顯增強(qiáng)了胃癌的發(fā)生率,相反地,采用6-OHDA進(jìn)行去交感神經(jīng)后,胃癌腫瘤的數(shù)量明顯減少,證實

3、了交感神經(jīng)在胃癌中的重要作用。但交感神經(jīng)是否也參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展過程這一關(guān)鍵問題尚不明確。
　　多項研究已證實在肝硬化患者及大鼠肝硬化模型中,肝內(nèi)交感神經(jīng)纖維的分布伴隨著假小葉的形成而發(fā)生改變,肝臟內(nèi)的交感神經(jīng)表現(xiàn)為過度興奮狀態(tài),這種過度興奮狀態(tài)促使交感神經(jīng)末梢釋放大量的去甲腎上腺素。部分研究也證實去甲腎上腺素可以作用于Kupffer細(xì)胞上的腎上腺素能受體,導(dǎo)致Kupffer細(xì)胞釋放大量炎癥因子。而其它相關(guān)研究也表明肝臟炎癥微環(huán)

4、境長期作用可導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、死亡和代償性增生并通過激活 NF-κB和 STAT3通路最終導(dǎo)致肝癌的形成。但是,在此過程中交感神經(jīng)是否通過調(diào)控Kupffer細(xì)胞參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展過程尚不清楚。
　　基于以上研究,本課題設(shè)想在肝硬化下,交感神經(jīng)過度興奮釋放大量去甲腎上腺素作用于Kupffer細(xì)胞的腎上腺素能受體,促使Kupffer細(xì)胞釋放大量炎癥因子形成炎癥微環(huán)境并長期作用于肝細(xì)胞,最終導(dǎo)致了肝癌的發(fā)生發(fā)展。因此,本課題通過化學(xué)性去

5、交感神經(jīng)末梢(6-OHDA,六羥基多巴胺)、阻斷 Kupffer細(xì)胞腎上腺素能受體(Prazosin,哌唑嗪)和清除Kupffer細(xì)胞(GaCl3,氯化釓)三種阻斷方式,探討不同方式阻斷交感神經(jīng)調(diào)控和清除 Kupffer細(xì)胞對誘導(dǎo)大鼠肝癌形成的影響及其機(jī)制,從而初步闡明交感神經(jīng)調(diào)控Kupffer細(xì)胞活化促進(jìn)肝癌形成及其機(jī)制。
　　二、目的:
　　通過建立DEN(二乙基亞硝胺)誘導(dǎo)的大鼠肝癌模型,探討不同方式阻斷交感神經(jīng)調(diào)控及

6、清除Kupffer細(xì)胞對大鼠肝癌形成的影響及其機(jī)制,初步闡明交感神經(jīng)調(diào)控Kupffer細(xì)胞活化促進(jìn)肝癌形成的機(jī)制。
　　三、方法:
　　1.通過DEN誘導(dǎo)建立大鼠肝癌模型,觀察誘癌過程中肝臟大體及組織病理變化,免疫組化檢測Kupffer細(xì)胞在誘癌過程中的動態(tài)變化。
　　2.統(tǒng)計分析 Kupffer細(xì)胞數(shù)量在誘癌過程中的變化,并采用 RT-PCR方法檢測Kupffer細(xì)胞相關(guān)炎癥因子和肝癌干細(xì)胞標(biāo)志在誘癌過程中的動態(tài)表達(dá)

7、,篩選出變化趨勢明顯的因子,探討篩選出的炎癥因子與肝癌干細(xì)胞標(biāo)志的相關(guān)性。
　　3.觀察化學(xué)性去交感神經(jīng)末梢(6-OHDA,六羥基多巴胺)、阻斷 Kupffer細(xì)胞去甲腎上腺素能受體(Prazosin,哌唑嗪)和清除Kupffer細(xì)胞(GaCl3,氯化釓)對DEN誘導(dǎo)大鼠肝癌的成瘤率及腫瘤數(shù)目和大小的影響。同時將第二部分篩選出的因子在各實驗組中進(jìn)行檢測驗證,分析該結(jié)果與肝癌形成的相關(guān)性。
　　四、結(jié)果
　　1.成功建立

8、 DEN誘導(dǎo)大鼠肝癌模型,動態(tài)觀察肝臟組織病理形態(tài),大致經(jīng)歷:慢性炎癥肝損傷期(1-12周)、肝增生纖維化期(12-16周)、肝硬化加重期(16-20周)和肝癌形成期(20-24周),確定肝硬化形成期在誘癌第16周左右,肝癌形成在第24周左右。
　　2.Kupffer細(xì)胞數(shù)量在誘癌過程中呈現(xiàn)逐漸增多的趨勢。并且通過RT-PCR方法檢測 Kupffer細(xì)胞相關(guān)炎癥因子及肝癌干細(xì)胞標(biāo)志在誘癌過程中的動態(tài)表達(dá),結(jié)果篩選出IL-6、TGF

9、-β和CD90指標(biāo)在誘癌過程中顯著升高,且IL-6、TGF-β與CD90的動態(tài)變化趨勢呈明顯正相關(guān)。
　　3.采用6-OHDA化學(xué)性去交感神經(jīng)末梢、Prazosin阻斷Kupffer細(xì)胞腎上腺素能受體和 GaCl3清除 Kupffer細(xì)胞后,顯著降低大鼠肝癌成瘤率及腫瘤數(shù)目和大小。且Prazosin實驗組、GaCl3實驗組和6-OHDA實驗組中IL-6、TGF-β和 CD90的表達(dá)比DEN誘導(dǎo)模型組明顯降低。
　　五、結(jié)論:

10、
　　1.通過成功建立 DEN誘導(dǎo)大鼠肝癌模型,動態(tài)觀察其肝臟組織病理形態(tài),模擬了“慢性炎癥—肝硬化—肝癌”形成過程。
　　2.Kupffer細(xì)胞數(shù)量及其分泌的IL-6、TGF-β隨誘癌過程進(jìn)展逐漸升高,同時肝癌干細(xì)胞標(biāo)志CD90也呈進(jìn)行性升高。在誘癌過程中IL-6、TGF-β與CD90的動態(tài)變化存在明顯正相關(guān)性,表明 Kupffer細(xì)胞釋放的 IL-6、TGF-β與肝癌的發(fā)生發(fā)展過程明顯相關(guān)。
　　3.交感神經(jīng)通過調(diào)