表皮生長因子受體抑制劑對JAK2V617F陽性細(xì)胞體外增殖的影響.pdf

1、目的:
　　1.研究表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑埃羅替尼對真性紅細(xì)胞增多癥患者骨髓中JAK2V617F突變陽性造血祖細(xì)胞在體外增殖的影響。
　　2.研究埃羅替尼和吉非替尼對HEL細(xì)胞株體外增殖活性的影響。
　　3.探討表皮生長因子受體抑制劑用于真性紅細(xì)胞增多癥靶向治療的潛能。
　　方法:
　　1.病例篩選:按照WH02008年修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn),從山東省立醫(yī)院確診的真性紅細(xì)胞增多癥患者中,采用等位基因特異性

2、PCR法篩選其中JAK2V617F突變型與JAK2野生型同時(shí)存在的患者為研究對象,共12例。
　　2.體外集落形成試驗(yàn):淋巴細(xì)胞分離液分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,IMDM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)4小時(shí)后,接種于甲基纖維素半固體培養(yǎng)基,無菌孵箱培養(yǎng)14d(設(shè)對照組和加入了埃羅替尼稀釋液的干預(yù)組,埃羅替尼在培養(yǎng)體系終濃度為5μM/L。),顯微鏡下鑒定CFU。應(yīng)用AS-PCR法鑒定集落是否包含JAK2V617F突變,分別統(tǒng)計(jì)數(shù)目。
　　3.四甲基偶

3、氮唑鹽(MTT)比色法試驗(yàn):檢測不同濃度的埃羅替尼和不同濃度的吉非替尼對HEL細(xì)胞株增殖活性的影響,并檢測不同濃度的埃羅替尼對K562細(xì)胞株增殖活性的影響。HEL細(xì)胞株已被證實(shí)存在天然的JAK2純合突變,K562細(xì)胞來自人慢性粒細(xì)胞白血病(JAK2突變陰性),而吉非替尼是一種EGFR抑制劑,作用機(jī)制及臨床應(yīng)用均與埃羅替尼類似。
　　結(jié)果:
　　1.干預(yù)組與對照組的CFU屬性分布有顯著性差異,干預(yù)組對比對照組JAK2V617F

4、陽性集落所占比例有所下降。表明埃羅替尼在5μM/L濃度時(shí)對真性紅細(xì)胞增多癥患者JAK2V617F突變陽性的造血祖細(xì)胞體外增殖具有抑μM/L制作用,而對患者正常造血祖細(xì)胞作用較小。
　　2.埃羅替尼抑制HEL細(xì)胞株的增殖活性,呈劑量依賴性,IC50為4.1μM/L。吉非替尼抑制HEL細(xì)胞株的增殖活性,呈劑量依賴性,IC50為6.2μM/L,提示吉非替尼對JAK2V617F陽性細(xì)胞的抑制作用弱于埃羅替尼。而埃羅替尼在此濃度水平下對K5