骨髓增殖性疾病中JAK2V617F突變與細(xì)胞因子受體表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：BCR/ABL陰性的慢性骨髓增殖性疾病(cMPDs)主要包括真性紅細(xì)胞增多癥(PV)、原發(fā)性血小板增多癥(ET)和原發(fā)性骨髓纖維化(IMF)。近期，在約90％的PV及一部分ET和IMF患者中發(fā)現(xiàn)了高致病性的獲得性JAK2V617F點(diǎn)突變。JAK2是一種組成性酪氨酸激酶，能激活JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)途徑。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)揭示BCR/ABL陰性的MPD的發(fā)病機(jī)制有重要意義。而引起PV等cMPDs的主要點(diǎn)突變JAK2V617F需與I型細(xì)胞因

2、子受體聯(lián)合表達(dá)才能發(fā)揮其組成性激活活性。脫離I型細(xì)胞因子受體，JAK2V617F不能充分發(fā)揮其生物活性。本研究旨在探討促紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)、粒細(xì)胞集落刺激因子受體(G-CSFR)、血小板生成素受體(C-MPL)在cMPDs中的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討B(tài)CR/ABL陰性的cMPDs的分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制，期望為JAK2V617F陽(yáng)性的cMPDs患者提供更為特異的靶向治療藥物奠定理論基礎(chǔ)。 方法：實(shí)驗(yàn)對(duì)象包括44例BCR/ABL

3、陰性的慢性骨髓增殖性疾病(1 6例PV、14例ET、14例IMF)患者、11例慢性粒細(xì)胞白血病(CML)患者、20名健康志愿者作為正常對(duì)照(NC)。本研究應(yīng)用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)JAK2V617F突變，根據(jù)JAK2V617F突變檢測(cè)結(jié)果將研究對(duì)象分為(1)NC組、(2)CML組、(3)JAK2V617F cMPDs治療組、(4)JAK2V617F+cMPDs治療組、(5)JAK2V617F-cMPDs初治組和(

4、6)JAK2V617F+cMPDs初治組。應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組促紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)mRNA、粒細(xì)胞集落刺激因子受體(G-CSFR)mRNA、血小板生成素受體(C-MPL)mRNA表達(dá)情況。結(jié)果： 1.應(yīng)用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)JAK2V617F突變情況，結(jié)果顯示在44例BCR/ABL陰性的cMPDs中有26例存在JAK2V617F點(diǎn)突變(陽(yáng)性率為59.1％)，其中包括9/16例PV

5、患者(陽(yáng)性率56.25％)、10/14例ET患者(陽(yáng)性率71.43％)、7/14例IMF患者(陽(yáng)性率50.0％)。而11例CML者和20名健康志愿者無一例存在JAK2V617F突變。 2.應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組EPOR mRNA、G-CSFR mRNA、C-MPL mRNA表達(dá)水平。 EPOR mRNA、G-CSFR mRNA、C-MPL mRNA在各組的表達(dá)情況： 2.1 EPOR mRNAEPOR

6、 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平各組資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布，方差不齊。經(jīng)單因素方差分析F=1063.8，P=0.000，各組間EPOR mRNA相對(duì)表達(dá)水平不完全相同，進(jìn)一步兩兩組間比較用t’檢驗(yàn)。所有cMPDs患者與正常對(duì)照組相比P值均＜0.05。JAK2突變陽(yáng)性的cMPDs患者治療前、后或JAK2突變陰性的cMPDs患者治療前、后相比P值均＜0.05，JAK2突變陰性與突變陽(yáng)性的cMPDs初治患者相比P＞0.05，JA

7、K2突變陰性cMPDs初治組與突變陽(yáng)性cMPDs的初治組相比P＞0.05。 2.2 G-CSFR.mRNAG-CSFR mRNA的相對(duì)表達(dá)水平各組資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布，且方差齊。經(jīng)單因素方差分析F=280.8 1 3，P=0.000，各組間G-CSFR.相對(duì)表達(dá)水平不完全相同，進(jìn)一步兩兩組間比較用LSD-t檢驗(yàn)。JAK2突變陽(yáng)性或突變陰性初治組與CML組相比P均＞0.05，與正常對(duì)照組、JAK2突變陰性治療組和J

8、AK2突變陽(yáng)性治療組相比P均＜0.05。 2.3 C-MPL mRNAC-MPL mRNA的相對(duì)表達(dá)水平各組資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布，且方差齊。經(jīng)單因素方差分析：F=41.272，P=0.000，各組間C-MPL mRNA相對(duì)表達(dá)水平不完全相同，進(jìn)一步兩兩組間比較用LSD-t檢驗(yàn)。JAK2突變陽(yáng)性初治組、JAK2突變陰性初治組和正常對(duì)照組相比P均＞0.05。cMPDs治療后與治療前相比P＜0.05。