慢性骨髓增殖性疾病JAK2基因突變發(fā)生情況及其靶向治療的研究.pdf

1、【背景與目的】 JAK/STST信號轉(zhuǎn)導途徑在多種細胞生長、活化、分化和凋亡等功能表達中發(fā)揮著十分重要的作用，它可以促發(fā)帶有酪氨酸殘基的蛋白發(fā)生磷酸化，產(chǎn)生激酶活化的級聯(lián)反應，并將活化的信號傳導給下游的其他分子，引發(fā)一系列基因和蛋白水平的變化。近年來國外學者發(fā)現(xiàn)PV、ET、IMF這一類的慢性骨髓增殖性疾病存在一致性的基因突變-JAK2V617F，這一發(fā)現(xiàn)對于理解這一類疾病的分子機理具有重要的意義，對于其診斷、鑒別診斷具有指導意義

2、，同時為其靶向治療提供了新的思路。鑒于國內(nèi)尚無類似的報道，我們檢測了137例MPD患者的JAK2V617F突變發(fā)生情況，研究其在國內(nèi)CMPD患者中的分布，建立可行可信的方法用于臨床檢測，同時，通過體外實驗研究酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼及JAK2激酶抑制劑AG490在這類疾病的靶向治療中的潛能。 【方法】 實驗第一部分：檢測了137例MPD患者的JAK2V617F突變發(fā)生情況。137例MPD患者為我院2000年4月至2006

3、年4月就診患者。按照WHO分型診斷標準，其中PV患者57例，ET患者68例，IMF患者12例，20例正常對照為我院體檢正常者。主要研究方法為：(1)基因組DNA提??； (2)等位基因特異性PCR方法擴增JAK2基因第12號外顯子，通過對擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳的方法篩選出JAK2V617F陽性患者，對部分陽性患者的PCR產(chǎn)物回收后進行測序；(3)分析患者的臨床及實驗室資料以了解JAK2V617F陽性患者的細胞遺傳學特征及臨床特征；

4、 實驗第二部分：將不同濃度的伊馬替尼、AG490作用于HEL細胞系和K562細胞系，在72小時用CCK-8kit試劑盒檢測增殖抑制率，流式細胞儀檢測對細胞凋亡的影響。 【結(jié)果】 1．137例MPD患者共檢出90例JAK2V617F陽性，總陽性率65.69％；其中PV57例，陽性率73.68％； ET68例，陽性率58.82％；IMF12例，陽性率66.67％；PV及ET患者JAK2V617F陽性組年齡比陰性組年齡高，

5、差別有顯著意義(P<0.05)。115例進行過染色體檢查的病人中7例存在核型異常，其中JAK2V617F陽性5例，陽性率為71.43％；染色體核型正常者108例，JAK2V617F陽性74例，陽性率68.51％：兩組差別無統(tǒng)計學意義。ET患者JAK2V617F陽性組白細胞計數(shù)較陰性組高，差別有顯著意義(P<0.05)；陽性組血紅蛋白與血小板計數(shù)較陰性組高，但差別無顯著意義。 2．伊馬替尼可顯著抑制HEL細胞系的生長，呈劑量依賴性

6、。其作用于HEL細胞系的IC<,50>較K562細胞明顯增高；AG490在50μM時可顯著誘導兩種細胞凋亡，其在72h時誘導K562細胞系凋亡的細胞占56.2％，誘導HEL細胞系凋亡的細胞占60.6％。低濃度AG490對細胞系作用效果不明顯。 【結(jié)論】 1．中國PV、ET、IMF患者中JAK2V617F發(fā)生率較高，其發(fā)生與年齡存在相關(guān)性，年齡大者較易發(fā)生； 2．進行JAK2V617F檢測有助于CMPD的診斷；

7、 3.等位基因特異性PCR方法檢測JAK2基因突變方法簡單，結(jié)果可靠，適用于臨床開展。 4．存在染色體核型組JAK2V617F發(fā)生率較核型正常組略高。 5．JAK2V617F突變陽性組患者外周血細胞計數(shù)較陰性組高。 6．伊馬替尼對HEL細胞系具有明顯的抑制增殖作用和促進凋亡作用，呈劑量依賴性，但其IC50較作用于K562細胞高。 7．50μM的AG490對HEL、K562細胞系具有明顯的促進凋亡作用。