骨髓增生異常綜合征患者JAK2和TET2基因突變的檢測及臨床意義.pdf

1、目的:2005年國際上多個研究小組幾乎同時報道在骨髓增殖性腫瘤(MPN)中發(fā)現(xiàn)JAK2V617F突變,但在骨髓增生異常綜合征(MDS)中發(fā)病率較低。國外報道JAK2V617F突變在MDS患者中的發(fā)生率在5％左右,但關于其臨床意義鮮見報道,鑒于目前國內(nèi)尚未見關于JAK2V617F突變研究的文獻報道,我們通過建立可行的等位基因特異性PCR(AS-PCK)檢測技術,對160例MDS患者骨髓或外周血標本進行了JAK2V617F基因突變分析,并初

2、步探討了與MDS分型、臨床特征及與MDS疾病進展的關系。
　　 2009年國外相繼報道,在MDS患者中發(fā)現(xiàn)目前為止突變最頻繁的基因異常一TET2基因,有報道突變率達22.9％,國內(nèi)尚未見相關報道,我們通過AS-PCR擴增產(chǎn)物后測序的方法,分別檢測了24例MDS患者TET2基因的11個外顯子,并對TET2基因突變與MDS臨床特征之間的相關性及預后意義進行了初步分析。
　　 方法:
　　 第一部分:通過建立等位基因特

3、異性PCR方法,研究160例MDS患者的JAK2V617F突變發(fā)生情況。160例MDS患者均為我院2006年5月至2009年5月我院門診及住院患者。按照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)分型診斷標準,RA型69例,RAS型8例,RCMD型8例,RAEB-1型22例,RAEB-2型28例,MDS-U型20例,5q-綜合征4例。20名正常對照為我院體檢正常者。
　　 主要研究方法為:
　　 (1)采集患者骨髓或外周血2ml,F

4、icoll-paque分離單個核細胞,運用基因組DNA抽提試劑盒進行DNA的抽提；
　　 (2)采用等位基因特異性PCR技術(AS-PCR)擴增JAK2基因,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳,篩選出突變陽性患者PCR產(chǎn)物進行測序證實。
　　 (3)通過統(tǒng)計學分析JAK2突變與部分臨床參數(shù)間的相關性。
　　 第二部分:通過AS-PCR擴增產(chǎn)物后測序的方法；檢測24例MDS患者TET2基因的11個外顯子中的突變發(fā)生情況。2

5、4例MDS患者均為我院2006年5月至2009年5月我院門診及住院患者。按照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)分型診斷標準,RA型7例,RAS型5例,RAEB-1型5例,RAEB-2型5例,MDS-U型2例。10名正常對照為我院體檢正常者。
　　 主要研究方法為:
　　 (1)運用基因組DNA抽提試劑盒進行DNA的抽提部分同第一部分；
　　 (2)采用等位基因特異性PCR技術(AS-PCR)擴增TET2基因,擴增產(chǎn)

6、物進行瓊脂糖凝膠電泳,所有出現(xiàn)目的條帶患者PCR產(chǎn)物進行測序,對比正常TET2基因從而發(fā)現(xiàn)突變異常。
　　 結果:
　　 1.160例MDS患者中JAK2V617F突變型8例,該突變在中國MDS患者中的發(fā)生率為5％。20例正常對照無一例突變陽性。
　　 2.經(jīng)過1-36個月的動態(tài)隨訪發(fā)現(xiàn),160例MDS患者中發(fā)生急性白血病轉化者12例(17.1％),中位轉化時間為3(1～13)月,其中M26例(50％),M42例

7、(16.7％),Ms2例(16.7％),M62例(16.7％)。JAK2基因突變型患者轉化率為37.5％(3/8)高于野生型的5.9％(9/152),差異有統(tǒng)計學意義(P=0.004)。
　　 3.24例MDS患者中檢測到2例17ET2突變,該突變在中國MDS患者中的發(fā)生率為8.3％。標本03號在第3號外顯子出現(xiàn)第273位氨基酸上缺失C突變,標本18號在第7號外顯子出現(xiàn)第1298位氨基酸上G-C突變。10例正常對照無一例突變陽性

8、。
　　 4.2例TET2基因突變型與22例野生型之間在一般臨床特征上差異無統(tǒng)計學意義,但1例突變在MDS進展至M4后TET2基因檢測仍發(fā)現(xiàn)同一突變,因標本例數(shù)較少,尚不能分析此突變與MDS預后之間的關系。
　　 結論：
　　 1.中國MDS患者中JAK2V617F突變發(fā)生率為5％,與國外相關報道結論一致。
　　 2.8例突變型患者中RAEB-2型3例(37.5％),RAEB-1型2例(25％),MDS-

9、U型2例(25％),RCMD型1例(12.5％)。MDS各亞型間JAK2V617F突變差異無統(tǒng)計學意義,在一般臨床特征上差異無統(tǒng)計學意義,但突變型的AL轉化率高于野生型,JAK2V617F突變與MDS繼發(fā)AL有一定相關性。
　　 3.中國MDS患者中TET2突變發(fā)生率為8.3％,低于國外相關報道,該結論有待于擴大樣本量進一步驗證。
　　 4.MDS患者中TET2突變均為單一改變,其中一例突變提示TET2突變在MDS疾病進