骨髓增生異常綜合征患者JAK2和TET2基因突變的檢測(cè)及臨床意義.pdf

1、目的:2005年國(guó)際上多個(gè)研究小組幾乎同時(shí)報(bào)道在骨髓增殖性腫瘤(MPN)中發(fā)現(xiàn)JAK2V617F突變,但在骨髓增生異常綜合征(MDS)中發(fā)病率較低。國(guó)外報(bào)道JAK2V617F突變?cè)贛DS患者中的發(fā)生率在5％左右,但關(guān)于其臨床意義鮮見(jiàn)報(bào)道,鑒于目前國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)關(guān)于JAK2V617F突變研究的文獻(xiàn)報(bào)道,我們通過(guò)建立可行的等位基因特異性PCR(AS-PCK)檢測(cè)技術(shù),對(duì)160例MDS患者骨髓或外周血標(biāo)本進(jìn)行了JAK2V617F基因突變分析,并初

2、步探討了與MDS分型、臨床特征及與MDS疾病進(jìn)展的關(guān)系。
　　 2009年國(guó)外相繼報(bào)道,在MDS患者中發(fā)現(xiàn)目前為止突變最頻繁的基因異常一TET2基因,有報(bào)道突變率達(dá)22.9％,國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道,我們通過(guò)AS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后測(cè)序的方法,分別檢測(cè)了24例MDS患者TET2基因的11個(gè)外顯子,并對(duì)TET2基因突變與MDS臨床特征之間的相關(guān)性及預(yù)后意義進(jìn)行了初步分析。
　　 方法:
　　 第一部分:通過(guò)建立等位基因特

3、異性PCR方法,研究160例MDS患者的JAK2V617F突變發(fā)生情況。160例MDS患者均為我院2006年5月至2009年5月我院門診及住院患者。按照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)分型診斷標(biāo)準(zhǔn),RA型69例,RAS型8例,RCMD型8例,RAEB-1型22例,RAEB-2型28例,MDS-U型20例,5q-綜合征4例。20名正常對(duì)照為我院體檢正常者。
　　 主要研究方法為:
　　 (1)采集患者骨髓或外周血2ml,F

4、icoll-paque分離單個(gè)核細(xì)胞,運(yùn)用基因組DNA抽提試劑盒進(jìn)行DNA的抽提；
　　 (2)采用等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)擴(kuò)增JAK2基因,擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,篩選出突變陽(yáng)性患者PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序證實(shí)。
　　 (3)通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析JAK2突變與部分臨床參數(shù)間的相關(guān)性。
　　 第二部分:通過(guò)AS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后測(cè)序的方法；檢測(cè)24例MDS患者TET2基因的11個(gè)外顯子中的突變發(fā)生情況。2

5、4例MDS患者均為我院2006年5月至2009年5月我院門診及住院患者。按照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)分型診斷標(biāo)準(zhǔn),RA型7例,RAS型5例,RAEB-1型5例,RAEB-2型5例,MDS-U型2例。10名正常對(duì)照為我院體檢正常者。
　　 主要研究方法為:
　　 (1)運(yùn)用基因組DNA抽提試劑盒進(jìn)行DNA的抽提部分同第一部分；
　　 (2)采用等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)擴(kuò)增TET2基因,擴(kuò)增產(chǎn)

6、物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,所有出現(xiàn)目的條帶患者PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,對(duì)比正常TET2基因從而發(fā)現(xiàn)突變異常。
　　 結(jié)果:
　　 1.160例MDS患者中JAK2V617F突變型8例,該突變?cè)谥袊?guó)MDS患者中的發(fā)生率為5％。20例正常對(duì)照無(wú)一例突變陽(yáng)性。
　　 2.經(jīng)過(guò)1-36個(gè)月的動(dòng)態(tài)隨訪發(fā)現(xiàn),160例MDS患者中發(fā)生急性白血病轉(zhuǎn)化者12例(17.1％),中位轉(zhuǎn)化時(shí)間為3(1～13)月,其中M26例(50％),M42例

7、(16.7％),Ms2例(16.7％),M62例(16.7％)。JAK2基因突變型患者轉(zhuǎn)化率為37.5％(3/8)高于野生型的5.9％(9/152),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。
　　 3.24例MDS患者中檢測(cè)到2例17ET2突變,該突變?cè)谥袊?guó)MDS患者中的發(fā)生率為8.3％。標(biāo)本03號(hào)在第3號(hào)外顯子出現(xiàn)第273位氨基酸上缺失C突變,標(biāo)本18號(hào)在第7號(hào)外顯子出現(xiàn)第1298位氨基酸上G-C突變。10例正常對(duì)照無(wú)一例突變陽(yáng)性

8、。
　　 4.2例TET2基因突變型與22例野生型之間在一般臨床特征上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但1例突變?cè)贛DS進(jìn)展至M4后TET2基因檢測(cè)仍發(fā)現(xiàn)同一突變,因標(biāo)本例數(shù)較少,尚不能分析此突變與MDS預(yù)后之間的關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 1.中國(guó)MDS患者中JAK2V617F突變發(fā)生率為5％,與國(guó)外相關(guān)報(bào)道結(jié)論一致。
　　 2.8例突變型患者中RAEB-2型3例(37.5％),RAEB-1型2例(25％),MDS-

9、U型2例(25％),RCMD型1例(12.5％)。MDS各亞型間JAK2V617F突變差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在一般臨床特征上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但突變型的AL轉(zhuǎn)化率高于野生型,JAK2V617F突變與MDS繼發(fā)AL有一定相關(guān)性。
　　 3.中國(guó)MDS患者中TET2突變發(fā)生率為8.3％,低于國(guó)外相關(guān)報(bào)道,該結(jié)論有待于擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　 4.MDS患者中TET2突變均為單一改變,其中一例突變提示TET2突變?cè)贛DS疾病進(jìn)