骨髓增生異常綜合征與線粒體細(xì)胞色素氧化酶基因突變.pdf

1、研究目的1.研究MDS線粒體細(xì)胞色素氧化酶基因COⅠ和COⅡ是否存在不同于正常組織的突變；2.這些突變是否存在熱點(diǎn)；3.發(fā)現(xiàn)新的單核苷酸多態(tài)性。 方法：18例MDS患者進(jìn)入該項(xiàng)研究，年齡20～70歲，其中RA2例，RCMD3例，RAEB7例，RAEB-t/AML5例，MPD/MDS1例。分別提取MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞和頰粘膜細(xì)胞的總DNA，在文獻(xiàn)報(bào)道的突變熱點(diǎn)上下游80個(gè)堿基外設(shè)計(jì)引物，將線粒體細(xì)胞色素氧化酶基因COⅠ和COⅡ

2、用PCR方法擴(kuò)增，得到528bp基因片斷，產(chǎn)物經(jīng)純化后測序，將結(jié)果與DNA文庫標(biāo)準(zhǔn)序列和患者自身正常組織對應(yīng)序列比較，對突變結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果：在所檢測的18例患者的線粒體細(xì)胞色素氧化酶基因COⅠ和COⅡ中長528bp的片斷中共發(fā)現(xiàn)2個(gè)單核苷酸多態(tài)性和一例單堿基插入，分別位7674T→C和7353A→G。插入突變?yōu)?702InsG，但該突變位于引物區(qū)，需進(jìn)一步的試驗(yàn)證實(shí)。 結(jié)論：1.根據(jù)我們的研究結(jié)果，沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素