癲癇大鼠海馬線粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ和Ⅳ表達(dá)的變化.pdf

1、目的：線粒體呼吸鏈中的5個(gè)酶復(fù)合體均由線粒體DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)和核DNA (nuclear DNA，nDNA) 編碼的蛋白產(chǎn)物共同組成。細(xì)胞色素氧化酶(cytochrome oxidase，COX)是線粒體呼吸鏈末端的限速酶，由mtDNA和nDNA共同編碼的13條亞基組成(COXⅠ、Ⅱ和Ⅲ由mtDNA編碼，其余由nDNA編碼)。已有研究證明中樞神經(jīng)系統(tǒng)線粒體功能障礙可導(dǎo)致癲癇發(fā)作，癲癇發(fā)作亦可引起

2、線粒體損傷。本研究通過(guò)建立大鼠癲癇模型觀察癲癇狀態(tài)(status epilepticus，SE)后不同時(shí)程大鼠海馬線粒體COXⅠ (mtDNA編碼)和COXⅣ(nDNA編碼)在基因和蛋白水平的表達(dá)變化及協(xié)同性，初步探討線粒體在分子水平與癲癇的關(guān)系，及核和線粒體基因在癲癇中的協(xié)同水平。 方法：選用6-8周齡健康成年雄性Wistar 大鼠60只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后急性期(3h)、靜止期(7d)、慢性期(

3、45d)組和注射匹魯卡品(PILO)但未出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)組。實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射氯化鋰3mEq/kg，18～20小時(shí)后再給予匹魯卡品30mg/kg腹腔注射，并于注射匹魯卡品前30min腹腔注入東莨宕1mg/kg，以拮抗其外周膽堿能反應(yīng)。免疫組化并熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各時(shí)程海馬線粒體COX Ⅰ、Ⅳ陽(yáng)性染色及其mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：COX Ⅰ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在SE后3h明顯增加，7d時(shí)降到對(duì)照水平，45d顯著降低；COX Ⅳ陽(yáng)性

4、細(xì)胞數(shù)SE后3h稍有增加，但較對(duì)照組無(wú)顯著性差異，靜止期(7d)和慢性期(45d))COXⅣ染色變化與對(duì)照組相似；注射PILO但未出現(xiàn)SE組COXⅠ、Ⅳ的表達(dá)與對(duì)照組類似。COX Ⅰ mRNA在SE后3h表達(dá)明顯升高(P<0.001)，7d時(shí)降到對(duì)照水平，45d顯著降低(P<0.001)：COX Ⅳ mRNA在3h時(shí)表達(dá)較對(duì)照組升高，但差異無(wú)顯著性，7d和45d時(shí)下降至對(duì)照水平。注射PILO但無(wú)SE組與對(duì)照組結(jié)果類似。 結(jié)論：