SPARC基因抑制骨髓增生異常綜合征(MDS)細(xì)胞增殖的作用機(jī)制.pdf

1、目的:構(gòu)建干擾SPARC基因表達(dá)和過表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染人骨髓增生異常綜合征(MDS)細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞，探討SPARC基因差異性表達(dá)對人MDS細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞增殖凋亡的影響。
　　方法:以SPARC-RNAi-LV, pcDNA-SPARC為模板的引物用PCR擴(kuò)增SPARC基因，將靶基因克隆入慢病毒載體，構(gòu)建含有SPARC基因的重組慢病毒載體SPARC-RNAi-LV, pGC-GV-SPARC，測序檢測正確性;將構(gòu)建載體轉(zhuǎn)染人

2、MDS細(xì)胞株SKM-1，流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率，RT-PCR檢測SKM-1細(xì)胞中SPARC mRNA表達(dá)，Western blot檢測SPARC蛋白表達(dá)，MTS法測定細(xì)胞增殖及小劑量阿糖胞苷(30ng/ml)對過表達(dá)實(shí)驗(yàn)組增殖抑制的影響，AnnexinⅤ檢測SPARC基因轉(zhuǎn)染后或過表達(dá)組加阿糖胞苷后對人SKM-1細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:構(gòu)建含有SPARC基因的重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染效率60％左右，轉(zhuǎn)染后SPARC mRNA及蛋白表

3、達(dá)在靶細(xì)胞中較對照組均有明顯改變。小劑量阿糖胞苷作用于SPARC過表達(dá)組對轉(zhuǎn)染組的增殖抑制率明顯高于其他組。SPARC基因轉(zhuǎn)染后人SKM-1細(xì)胞凋亡率較未轉(zhuǎn)染組明顯，SPARC過表達(dá)組加入阿糖胞苷后人SKM-1細(xì)胞凋亡率較對照組顯著增高。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建了攜人SPARC基因的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染人SKM-1細(xì)胞株后穩(wěn)定表達(dá)SPARC基因，SPARC的改變可影響細(xì)胞增殖，此外SPARC過表達(dá)聯(lián)合小劑量阿糖胞苷(30ng/ml)更有效