骨髓增殖性腫瘤JAK2及TET2基因突變分析及意義.pdf

1、2005年，國際上多個研究小組幾乎同時報道，在骨髓增殖性腫瘤(myeloproliferative neoplasm，MPN)患者造血干/祖細胞水平存在的獲得性，克隆性的Janus激酶2(the janus kinase2，JAK2)V617F體細胞突變。隨后，國內(nèi)外學(xué)者對其進行了廣泛的研究。據(jù)報道，JAK2 V617F存在于65％～97％的真性紅細胞增多癥(polycythemiavera，PV)及23％～60％的原發(fā)性血小板增多癥(

2、essentialthrombocythemia，ET)和35％～64％的原發(fā)性骨髓纖維化(primarymyelofibrosis，PMF)以及20％慢性中性粒細胞白血病(chronicneutrophil leukemia，CNL)患者中。隨著JAK2 V617F突變在MPN發(fā)病中的逐漸認識，2008年世界衛(wèi)生組織(the World HealthOrganization，WHO)對MPN提出了新的分類及診斷標準。在新的分類及診斷標

3、準中，強調(diào)了JAK2 V617F突變等其他分子及細胞遺傳學(xué)事件在MPN中的作用。然而，JAK2 V617F突變并不是MPN所特有，如在5％骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome，MDS)患者也存在。另外，單一的JAK2 V617F突變在臨床上會引起不同的疾病亞型。JAK2 V617F陰性的MPN是如何發(fā)病的，是否存在其他的癌基因或抑癌基因事件促進MPN的發(fā)生或影響其表型，也不是很清楚，尚有待進一步研究。20

4、08年，Delhommeau等率先報道，在MPN患者中存在一種新的潛在抑癌基因ten-eleventranslocation2(TET2)的突變。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，TET2基因突變廣泛存在于各型JAK2 V617F陽性或陰性的MPN，MDS、原發(fā)或繼發(fā)的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)中。TET2突變包括框移突變，無義突變和錯義突變，發(fā)生在TET2基因的多個外顯子及多個位點上，但以3號，11號外顯子最

5、多見。盡管對JAK2V617F突變有些研究報道，但關(guān)于MPN中TET2基因突變及其臨床特征，目前國內(nèi)尚未見相關(guān)報道。為此，本研究分析了MPN患者中JAK2 V617F和TET2基因的突變情況及其臨床特征，TET2基因突變與JAK2 V617F突變對MPN患者表型的影響。
　　 首先，抽取40例MPN患者的骨髓或外周血，并提取其細胞基因組DNA，采用等位基因特異性熒光實時定量PCR(polymerasechain reaction

6、，PCR)方法分析JAK2 V617F突變。同時，對所有患者TET2基因進行PCR擴增。在此基礎(chǔ)上，將通過瓊脂糖凝膠電泳驗證的PCR擴增產(chǎn)物進行DNA序列測定，測序結(jié)果與美國國家生物技術(shù)信息學(xué)中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)提供的DNA數(shù)據(jù)庫進行同源性比較，分析TET2基因突變情況。最后，分析TET2基因突變的臨床特征以及TET2基因突變與JAK2 V617F突

7、變對患者表型的影響。
　　 結(jié)果顯示，40例MPN患者中，28例為JAK2 V617F突變陽性，占所檢測患者的70％。其中，PV患者16例(占所檢測PV患者的76.2％)，ET患者7例(占所檢測ET患者的53.8％)，以及5例無法明確分型的MPN患者。JAK2 V617F突變型PV患者發(fā)病年齡高于野生型患者(P=0.020)，JAK2 V617F突變型ET患者外周血白細胞計數(shù)高于野生型患者(P=0.026)，但血小板數(shù)低于野生型

8、患者(P=0.048)。40例MPN患者中，有4例存在TET2基因突變，占所檢測患者的10％。其中，2例為PV患者，另2例為ET患者。在這4例患者中，TET2基因突變均發(fā)生TET2基因的第11號外顯子，分別是位于TET2基因第5548位核苷酸的T突變?yōu)镚，導(dǎo)致第1721位亮氨酸突變?yōu)樯彼?；位于TET2基因第5670位核苷酸的A突變?yōu)镚，此突變使TET2的第1762位異亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸；位于TET2基因第6269位核苷酸的G突變?yōu)锳，

9、該突變?yōu)橥x突變；位于TET2基因第6364位核苷酸的G突變?yōu)锳，導(dǎo)致TET2第1993位精氨酸突變?yōu)闉楣劝滨０贰?例TET2基因突變患者均存在JAK2 V617F突變。TET2突變型患者在發(fā)病年齡、性別、外周血白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血小板數(shù)以及血紅蛋白濃度與野生型患者無顯著性差異。
　　 以上結(jié)果表明，JAK2 V617F突變存在于大部分MPN患者，且JAK2 V617F陽性與JAK2 V617F陰性患者臨床特征存在一定差異。T