慢性骨髓增殖性疾病發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、慢性骨髓增殖性疾病(myeloproliferativedisorders，MPD)是造血干細(xì)胞克隆增殖性疾病，在骨髓和外周血有一系或多系血細(xì)胞的增生。WilliamDameshek在1951年最早提出了MPD的概念，主要包括真性紅細(xì)胞增多癥(PV)，原發(fā)性血小板增多癥(ET)，慢性粒細(xì)胞性白血病(CML)，骨髓纖維化(MF)。后來(lái)其他一些粒系疾病也被歸入MPD，如原發(fā)性嗜酸粒細(xì)胞增多癥(HES)，慢性中性粒細(xì)胞白血病(CNL)，慢性粒

2、一單核細(xì)胞白血病(CMML)，系統(tǒng)性肥大細(xì)胞病(SM)等。Bcr/abl融合基因被發(fā)現(xiàn)后，CML即單獨(dú)列出，真性紅細(xì)胞增多癥，原發(fā)性血小板增多癥，骨髓纖維化三類(lèi)疾病被稱(chēng)為經(jīng)典型MPD，其他為非經(jīng)典型MPD。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，許多非經(jīng)典型MPD的發(fā)病機(jī)制得到了揭示，如：原發(fā)性嗜酸粒細(xì)胞增多癥的FIPlLl-PDGFRA融合基因；系統(tǒng)性肥大細(xì)胞病的c-kit突變；慢性嗜酸細(xì)胞白血病的PDGFRB重排，F(xiàn)GFRl的重排；慢性粒一單核

3、細(xì)胞白血病的RAS信號(hào)通路基因的突變等。但對(duì)于三類(lèi)經(jīng)典型MPD的分子發(fā)病機(jī)制一直不明確。直到最近酪氨酸蛋白激酶基因JAK2在MPD患者中的高突變率JAK2V617F才使人們對(duì)三類(lèi)經(jīng)典型MPD的分子發(fā)病機(jī)制有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。 JAK2基因是位于胞漿的酪氨酸蛋白激酶基因，參與細(xì)胞因子受體的下游信號(hào)通路。我們應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MassARRAY)，BsaXI限制性酶切分析，DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)了162例MPD

4、患者的JAK2V617F突變，83.1％(49/59)的PV患者，55.7％(34/61)的ET患者，69.2％(9/13)的MF患者檢測(cè)到JAK2V617F突變。在9例CMML和20例HES患者和171例對(duì)照組病例中未發(fā)現(xiàn)該突攣。PV患者中突變陽(yáng)性者的白細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白數(shù)均較陰性者為高。同時(shí)我們對(duì)三種不同檢測(cè)手段進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)MassARRAY對(duì)JAK2V617F的檢測(cè)較精確；BsaXI限制性酶切分析適合于最初的篩查，可避免漏檢；D

5、NA測(cè)序技術(shù)比較直觀，可以發(fā)現(xiàn)未知突變。 盡管JAK2V617F在MPD患者中的突變率較高，但還是有部分患者，尤其ET患者無(wú)該突變，這些患者的發(fā)病機(jī)制又是怎樣的呢?MPL是人血小板生成素(TPO)受體(TPOR)，屬于造血因子受體超家族的一員。原發(fā)性血小板增多癥患者的MPL表達(dá)過(guò)高而真性紅細(xì)胞增多癥患者和骨髓纖維化患者的MPL表達(dá)則顯著下降。2006年7月，國(guó)外學(xué)者首次報(bào)導(dǎo)在5％的MF患者和1％的ET患者存在MPL515位點(diǎn)的突

6、變，因此我們進(jìn)一步檢測(cè)了MPL基因編碼區(qū)，并在2例ET患者檢測(cè)到MPL515突變，占ET患者的3％，其中1例為MPLW515L，另1例為MPLW515K，兩例患者均為JAK2V617F陰性，而且兩例患者的血小板計(jì)數(shù)均明顯增高。MPL基因突變揭示了JAK2V617F陰性患者的發(fā)病機(jī)制。 lIES作為一類(lèi)非經(jīng)典的MPD疾病近來(lái)被發(fā)現(xiàn)FIPlLl-PDGFRA融合基因與疾病的發(fā)生有密切相關(guān)性，在我們的HES樣本中既往已檢測(cè)過(guò)FIPlL

7、l-PDGFRA融合基因的表達(dá)，約30％的患者陽(yáng)性，大部分HES患者的融合基因是陰性的。在進(jìn)一步檢測(cè)JAK2V617F和MPL基因突變時(shí)均未發(fā)現(xiàn)異常，那么這些占大多數(shù)的融合基因陰性的HES的發(fā)病機(jī)制又是怎樣的呢?FGFR1是一類(lèi)穿膜的酪氨酸激酶受體，F(xiàn)GFR1的重排常見(jiàn)于HES，位于8號(hào)染色體短臂的FGFR1基因發(fā)生斷裂，與伙伴基因發(fā)生交互易位，形成融合基因。FLT3為Ⅲ型受體酪氨酸激酶家族，最近有報(bào)導(dǎo)在一例MPD患者檢測(cè)到t(12；1

8、3)(p13；q12)形成TEL-FLT3融合基因，而TEL-FLT3融合基因轉(zhuǎn)基因小鼠則出現(xiàn)MPD的表現(xiàn)。基因突變是腫瘤細(xì)胞染色體異常以外的重要遺傳學(xué)改變特征，受體酪氨酸激酶所發(fā)生的點(diǎn)突變與染色體易位形成的融合基因相互協(xié)同是腫瘤發(fā)病機(jī)制中的重要因素。目前尚未有關(guān)于FGFR1和FLT3基因突變與HES關(guān)系的報(bào)導(dǎo)，因此我們又在HES患者中檢測(cè)了FGFR1和FLT3基因突變。在一例患者中檢測(cè)到FLT3激酶活性區(qū)的缺失突變(2654_2753