毛裂蜂斗菜中蜂斗菜總內(nèi)酯的制備及生物活性研究.pdf

1、毛裂蜂斗菜(Petasites tricholobus Franch．)是菊科蜂斗菜屬植物，廣泛分布于西南、西北地區(qū)，其根莖民間用于解毒祛瘀，外敷治跌打損傷、骨折蛇傷等，其花蕾在中國西北地區(qū)作為款冬花的替代品用于止咳、平喘。 研究背景：蜂斗菜屬植物歐蜂斗菜(Petasites hybridus)作為植物藥，在歐洲已經(jīng)有幾百年的應用歷史。其根莖的二氧化碳提取物用于治療偏頭疼，泌尿生殖道痙攣，哮喘，過敏性鼻炎等。倍半萜類化合物被認為

2、是其主要有效成分，現(xiàn)代藥理研究表明，蜂斗菜素(petasin)和硫蜂斗菜素(S-petasin)等倍半萜類化合物具有抗組胺，抑制白三烯合成，降低細胞內(nèi)鈣離子濃度的作用，從而達到抗炎、解痙的藥效。倍半萜內(nèi)酯類化合物，初步的體外藥理實驗表明，這類化合物有細胞毒性，具有潛在的抗癌活性，并且可抑制血小板活化因子，達到抗凝的作用。為了開發(fā)我國蜂斗菜屬植物資源，本課題組在前期對其同屬植物毛裂蜂斗菜(Petasites tricholobus Fra

3、nch．)的化學成分進行了較為系統(tǒng)性的研究，從毛裂蜂斗菜根莖中分離得到倍半萜內(nèi)酯類化合物蜂斗菜內(nèi)酯D、蜂斗菜內(nèi)酯B以及蜂斗菜內(nèi)酯Ⅰa(1)，蜂斗菜內(nèi)酯Ⅱ a(2)，蜂斗菜內(nèi)酯Ⅲa(3)，蜂斗菜內(nèi)酯Ⅳa(4)，蜂斗菜內(nèi)酯Ⅴa(5)5個倍半萜類新化合物，以及考察了蜂斗菜內(nèi)酯Ⅰa-Ⅴa對缺氧-復氧造成的神經(jīng)元損傷及氧化性損傷的保護作用，本研究在此基礎(chǔ)之上，進一步對其內(nèi)酯類化學成分進行生物活性研究。 研究目的：通過對毛裂蜂斗菜中總內(nèi)酯的

4、制備以及生物活性研究，明確其藥理活性，并對其藥效機理進行深入的探討，為毛裂蜂斗菜資源的開發(fā)利用以及新藥的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。 研究內(nèi)容和方法： 樣品的采集：毛裂蜂斗菜采自四川成都。 1．毛裂蜂斗菜中蜂斗菜總內(nèi)酯的制備以及含量的HPLC測定：將毛裂蜂斗菜用95％乙醇滲漉提取，提取液濃縮至無乙醇味、冷卻，上大孔樹脂，依次用60％、80％、95％乙醇洗脫，然后將80％乙醇洗脫液減壓濃縮至干，可得蜂斗菜總內(nèi)酯。應用HPLC測定

5、蜂斗菜總內(nèi)酯B、D、Ⅳa、Ⅲa的含量。 2．蜂斗菜總內(nèi)酯過敏性鼻炎的藥效學研究。首先對豚鼠以卵清白蛋白(OVA)抗原攻擊，依次基礎(chǔ)致敏、致敏加強和激發(fā)三個階段成功的建立了過敏性鼻炎(AR)的模型，成功率100％，然后給予蜂斗菜總內(nèi)酯40mg/kg連續(xù)7天，初步證實了蜂斗菜總內(nèi)酯的抗過敏性鼻炎活性。然后對Wistar大鼠同樣以卵清白蛋白(OVA)抗原攻擊，依次基礎(chǔ)致敏、致敏加強和激發(fā)三個階段成功的建立了大鼠過敏性鼻炎的模型，成功率

6、82.7％，并首次用ELISA實驗評價了過敏Wistar大鼠血清中總IgE的效價，進一步佐證模型的成功，然后分別給予蜂斗菜總內(nèi)酯40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg以及氯雷他定0.942mg/kg連續(xù)7天，結(jié)果表明蜂斗菜總內(nèi)酯各個劑量和氯雷他定均能不同程度的減輕抗原誘導的大鼠過敏性鼻炎的癥狀，并通過對大鼠鼻粘膜病理組織學檢查來觀察浸潤的嗜酸性淋巴細胞的數(shù)目的變化。 3．蜂斗菜總內(nèi)酯治療過敏性鼻炎的機理探討

7、。用ELISA實驗方法測定血清中IL-4以及組胺的含量。 4．蜂斗菜總內(nèi)酯體內(nèi)對二甲苯致ICR小鼠耳腫脹的影響。蜂斗菜總內(nèi)酯40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg對ICR小鼠灌胃連續(xù)給藥7天，末次給藥后45min，右耳涂以50μl二甲苯致炎，15min后將小鼠頸脫臼致死，用內(nèi)徑7mm的打孔器打下相同部位左右耳片，稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。以此為標準來觀察蜂斗菜總內(nèi)酯的抑制炎性水腫的作用。 5

8、．蜂斗菜總內(nèi)酯體內(nèi)外抗腫瘤活性研究。依次用蜂斗菜總內(nèi)酯160、80、40、20、10、5、2.5、1.25ug/ml對HePG2、MCF-7、A549、Hela腫瘤細胞體外MTT實驗以及ICR小鼠體內(nèi)S180腫瘤實驗，在接種第二天分別給予蜂斗菜總內(nèi)脂160mg/kg、80mg/kg、40mg/kg連續(xù)給藥14天，第16天眼眶取血、脫頸處死剝離腫瘤、并取脾臟和胸腺稱重記錄。 結(jié)果和結(jié)論：蜂斗菜總內(nèi)酯減少過敏性大鼠搔鼻、噴嚏次數(shù)以及

9、減輕鼻涕癥狀，并能有效減少鼻粘膜中嗜酸性淋巴細胞數(shù)目，ELISA實驗結(jié)果表明它還能顯著降低血清中IL-4和Histamine含量，故而推斷毛裂蜂斗菜總內(nèi)酯抗過敏性鼻炎的機制是通過抑制IL-4使特異性抗體IgE降低，阻斷AR癥狀的主要炎性介質(zhì)組胺作用于H1受體的過程，具有與H1受體拮抗劑相似的藥理作用，從而達到緩解鼻炎癥狀的目的；蜂斗菜總內(nèi)酯能夠有效降低毛細血管通透性，具備一定的抑制炎性水腫的作用。本研究結(jié)果為蜂斗菜總內(nèi)酯的進一步開發(fā)奠定