孤束核在針刺調(diào)節(jié)大鼠血壓及胃腸感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)中的作用.pdf

1、《靈樞·海論》“夫十二經(jīng)脈者，內(nèi)屬于府藏，外絡(luò)于肢節(jié)”的記載，說(shuō)明溝通臟腑與體表肢節(jié)的聯(lián)系是十二經(jīng)脈的重要功能。針刺通過(guò)刺激人體體表的穴位以達(dá)到治療內(nèi)臟疾病調(diào)節(jié)內(nèi)臟功能的作用?，F(xiàn)代臨床研究顯示針刺治療心血管、胃腸等各種內(nèi)臟疾病效果顯著，并有一定的穴位特異性。
　　針刺對(duì)內(nèi)臟功能的調(diào)節(jié)是由脊髓及脊髓上中樞協(xié)同完成的。針刺引起的體表-內(nèi)臟反射是其調(diào)節(jié)心血管、胃腸等內(nèi)臟功能的重要神經(jīng)反射形式，可分為脊髓固有反射及脊髓上反射兩種形式。體表

2、-自主神經(jīng)反射分為體表-交感和體表-副交感反射兩種，由器官的自主神經(jīng)支配特性和刺激部位的脊髓節(jié)段性決定，同時(shí)受刺激強(qiáng)度和種類的影響。孤束核(nucleus of tractus solitary，NTS)位于延髓背側(cè)，是迷走神經(jīng)感覺(jué)傳入的第一級(jí)中樞，參與心血管、呼吸、胃腸等多種內(nèi)臟功能的調(diào)控，也是心血管壓力感受性反射、胃腸感覺(jué)的第一級(jí)感覺(jué)中繼站：同時(shí)NTS與迷走神經(jīng)背核、延髓尾端腹外側(cè)核(rostral Ventrolateral Me

3、dtdla，rVLM)、延髓頭端腹外側(cè)核(caudal Ventrolateral Medulla，cVLM)、疑核等中樞核團(tuán)有纖維聯(lián)系，通過(guò)交感和副交感神經(jīng)傳出通路完成對(duì)內(nèi)臟功能的調(diào)節(jié)。
　　針刺調(diào)節(jié)內(nèi)臟功能，常見(jiàn)單一穴位或依據(jù)傳統(tǒng)穴位配伍的多穴調(diào)節(jié)一臟的報(bào)道。例如內(nèi)關(guān)對(duì)心血管功能的影響，足三里對(duì)胃腸功能的作用。未涉及穴位選取的規(guī)律性總結(jié)。本研究根據(jù)哺乳動(dòng)物皮膚，肌肉，內(nèi)臟神經(jīng)分布的節(jié)段性特點(diǎn)，結(jié)合體表刺激引起軀體一植物神經(jīng)反射

4、的前期研究報(bào)道，探討不同節(jié)段穴位，不同刺激方式引起的內(nèi)臟植物神經(jīng)反射的規(guī)律，力求從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)總結(jié)出針刺對(duì)特定內(nèi)臟功能進(jìn)行交感樣和副交感樣調(diào)節(jié)的規(guī)律。本研究通過(guò)電生理學(xué)方法在中樞鑒別出NTS與心血管、胃腸等內(nèi)臟功能及結(jié)直腸擴(kuò)張(colorectal distention，CRD)刺激相關(guān)的神經(jīng)元，同時(shí)記錄甲均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure，MAP)、胃運(yùn)動(dòng)，選取不同神經(jīng)節(jié)段的穴位進(jìn)行針刺刺激，觀察不同穴位對(duì)MAP和胃運(yùn)

5、動(dòng)的影響，并同步觀察NTS與血壓調(diào)節(jié)、胃運(yùn)動(dòng)、CRD刺激相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)，研究NTS在降壓、調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)和抑制CRD誘導(dǎo)內(nèi)臟痛中的作用。
　　1針刺對(duì)MAP的影響及NTS與血壓調(diào)節(jié)相關(guān)神經(jīng)元在針刺降壓中的作用
　　1.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　研究針刺對(duì)正常麻醉大鼠MAP、靜脈注射去氧腎上腺素(phenylephrine，PE)，硝普鈉(sodium nitroprusside，NP)分別引起升壓甲臺(tái)期、降壓平臺(tái)期時(shí)MAP的影

6、響，并同步觀察NTS與升壓(hypertensive related neurons)、降壓反射相關(guān)神經(jīng)元(hypotensive related neurons)在針刺調(diào)節(jié)血壓時(shí)放電活動(dòng)的變化，探討NTS中與升壓、降壓反射相關(guān)神經(jīng)元在介導(dǎo)針刺降壓中的作用。
　　1.2實(shí)驗(yàn)方法
　　本課題所有研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程均遵守美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院倡導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)和使用指導(dǎo)原則(Guide for Care and Use of Labor

7、atory Animals，NIH)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置遵照科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》規(guī)定。
　　實(shí)驗(yàn)選用健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠81只，體重300～380g之間，用10％的烏拉坦腹腔注射麻醉(urethane，1.0～1.2g/kg體重)。手術(shù)及實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物體溫用動(dòng)物恒溫系統(tǒng)維持在37℃左右。大鼠麻醉后進(jìn)行頸動(dòng)、靜脈插管、氣管插管，并暴露延髓后，監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓和心率，同步記錄MAP及NTS神

8、經(jīng)元放電，在微電極推進(jìn)器下，找到自發(fā)放電穩(wěn)定的NTS神經(jīng)元，經(jīng)靜脈推注30s左右PE(4μg/kg)、NP(NP，20ug/kg)，以判斷該神經(jīng)元對(duì)升壓反射、降壓反射的反應(yīng)及鑒別出與升壓反射和降壓反射相關(guān)神經(jīng)元。對(duì)升壓反射和降壓反射相關(guān)神經(jīng)元，待自發(fā)放電穩(wěn)定、MAP恢復(fù)至正常后，記錄30s放電脈沖數(shù)作為對(duì)照值，分別電針(波寬500ms，10Hz，1mA)“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”各30秒。為排除針刺穴位順序?qū)ι窠?jīng)元放電結(jié)果的影響，

9、穴位針刺順序隨機(jī)選擇，觀察對(duì)MAP及血壓調(diào)節(jié)相關(guān)神經(jīng)元放電的影響。然后在大鼠頸靜脈微量注射PE(6～12μg/kg，10-15min)或者NP(60～80μg/kg，10～15 min)分別造成藥物性血壓升高、藥物性血壓降低模型各15min左右，在升壓平臺(tái)期、降壓平臺(tái)期再分別電針上述穴位，并觀察對(duì)動(dòng)脈血壓和NTS神經(jīng)元放電的影響。
　　1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.3.1 NTS與血壓反射相關(guān)神經(jīng)元的鑒別
　　麻醉大鼠頸靜脈

10、注射PE，完整記錄120個(gè)NTS細(xì)胞放電(細(xì)胞記錄不完整者不做統(tǒng)計(jì)，下同)，其中70個(gè)細(xì)胞(58.3％)放電頻率無(wú)變化；26個(gè)細(xì)胞(21.7％)放電頻率減少，呈抑制反應(yīng)；24個(gè)細(xì)胞(20.0％)放電頻率增加，呈興奮反應(yīng)。
　　麻醉大鼠頸靜脈注射NP，完整記錄101個(gè)NTS細(xì)胞放電，其中52個(gè)細(xì)胞(51.5％)放電頻率無(wú)變化：29個(gè)細(xì)胞(28.7％)放電頻率減少，呈抑制反應(yīng)；20個(gè)細(xì)胞(19.8％)放電頻率增加，呈興奮反應(yīng)。

11、　　1.3.2電針刺激對(duì)麻醉大鼠生理狀態(tài)下MAP及NTS神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　電針“耳穴心”和“足三里”能夠明顯降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的MAP，與此同時(shí)，NTS與升壓、降壓反射相關(guān)神經(jīng)元的放電明顯增加。電針“內(nèi)關(guān)”雖然也能輕度激活NTS神經(jīng)元放電，但對(duì)MAP沒(méi)有明顯影響。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，正常血壓狀態(tài)下，電針“耳穴心”使動(dòng)物的MAP由100.11±3.3mmHg下降為88.47±3.75mmHg，下降幅度為11.64±0.45 mmHg(P

12、<0.001)；電針“足三里”使MAP下降了5.74±0.64 mmHg(P<0.001)，電針“內(nèi)關(guān)”對(duì)MAP無(wú)顯著影響。不同穴位組間降壓效應(yīng)比較顯示，電針“耳穴心”、“足三里”對(duì)正常MAP的影響大于“內(nèi)關(guān)”(P<0.05)。
　　針刺不同穴位引起MAP變化，同時(shí)影響正常生理性血壓狀態(tài)下NTS與血壓反射相關(guān)神經(jīng)元的放電頻率，這種影響主要以興奮性為主。在MAP正常狀態(tài)下，電針大鼠不同穴位，對(duì)血壓反射有興奮或抑制性反應(yīng)的神經(jīng)元放電頻

13、率發(fā)生明顯變化。電針大鼠“耳穴心”(n=50)，25個(gè)神經(jīng)元(50％)放電頻率增加，(凈增加率為115.2±15.25％)。電針“內(nèi)關(guān)”穴(n=50)，24個(gè)神經(jīng)元(48％)放電頻率增加(凈增加率為54.24±6.89％)。電針“足三里”穴(n=47)，20個(gè)神經(jīng)元(42.55％)放電頻率增加(凈增加率為103.35±14.78％)。組間比較顯示，電針”耳穴心”和“足三里”兩個(gè)穴位對(duì)神經(jīng)元的激活百分比增加率顯著高于“內(nèi)關(guān)”穴(P<0.0

14、5)。
　　1.3.3電針刺激對(duì)PE引起血壓升高狀態(tài)MAP和NTS升壓反射相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　大鼠頸靜脈注射PE(12～16μg/kg，10～15 min)造成藥物性升壓模型，MAP由99.28±3.82 mmHg上升并維持在121.66±2.91 mmHg(P<0.001)。電針“耳穴心”和“足三里”能明顯降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物升壓平臺(tái)期的。MAP，與此同時(shí)，NTS與升壓反射相關(guān)神經(jīng)元的放電明顯增加。電針“內(nèi)關(guān)”雖然能輕度

15、激活NTS神經(jīng)元放電，但對(duì)MAP沒(méi)有明顯影響。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，在PE引起的升壓甲臺(tái)期，電針“耳穴心”使MAP由124.17±4.43 mmHg下降到118.7±3.64 mmHg，下降幅度8.30±0.79 mmHg(P<0.001)；電針“足三里”使MAP下降6.07±0.79 mmHg(P<0.05)；電針“內(nèi)關(guān)”對(duì)MAP無(wú)明顯影響。組間比較顯示(one-way ANOVA)，電針“耳穴心”、“足三里”的降壓效應(yīng)優(yōu)于“內(nèi)關(guān)”(P<0.

16、05)。電針同一穴位對(duì)麻醉大鼠正常狀態(tài)和PE引起血壓升高狀態(tài)下MAP的影響無(wú)明顯差異(independent t test，P>0.05)。
　　電針不同穴位引起升壓平臺(tái)期MAP變化，同時(shí)對(duì)NTS與升壓反射相關(guān)神經(jīng)元的放電頻率產(chǎn)生影響，這種作用主要以興奮性為主，使神經(jīng)元放電增加。對(duì)升壓反射有興奮或抑制性反應(yīng)的50個(gè)神經(jīng)元中，完成升壓甲臺(tái)期記錄及針刺實(shí)驗(yàn)的共21個(gè)。電針大鼠耳甲區(qū)穴位，9個(gè)放電頻率增加，凈增加率為92.94±10.4

17、2％。電針“內(nèi)關(guān)”穴，9個(gè)放電頻率增加，凈增加率為44.66±6.27％。電針“足三里”穴，8個(gè)放電頻率增加，凈增加率為86.73±5.57％。組間比較顯示，電針“耳穴心”和“足三里”兩個(gè)穴位對(duì)神經(jīng)元的激活百分比增加率顯著高于“內(nèi)關(guān)”穴(P<0.05)。
　　1.3.4電針刺激對(duì)NP引起血壓降低狀態(tài)MAP和NTS降壓反射相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　大鼠頸靜脈注射NP(60～80μg/kg，10～15 min)造成藥物性降壓

18、模型，MAP由96.56±2.24mmHg下降并維持在78.29±1.84 mmHg。電針不同穴位能明顯降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物降壓平臺(tái)期的MAP，與此同時(shí)，NTS與降壓反射相關(guān)神經(jīng)元的放電顯著增加。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，在NP引起的降壓平臺(tái)期，電針“耳穴心”使MAP由79.76±1.39mmHg下降到69.32±2.48 mmHg，下降幅度10.44±1.60mmHg(P<0.001)；電針“內(nèi)關(guān)”使MAP下降7.93±1.20mmHg(P<0.05)；

19、電針“足三里”使MAP下降15.63±1.76mmHg(P<0.05)；組間比較顯示(one-wayANOVA)，電針上述三個(gè)穴位的降壓效應(yīng)無(wú)差異(P>0.05)。電針“耳穴心”、“足三里”，對(duì)麻醉大鼠生理情況MAP及NP降壓狀態(tài)MAP的影響無(wú)明顯差異，電針“內(nèi)關(guān)”對(duì)降壓平臺(tái)期血壓的降壓效應(yīng)好于生理狀態(tài)(independent，t est，P<0.05)。
　　電針不同穴位引起降壓平臺(tái)期MAP變化，同時(shí)，對(duì)NTS與降壓反射相關(guān)神經(jīng)

20、元的放電頻率產(chǎn)生影響，這種作用主要以興奮性為主。電針“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”和“足三里”使NTS內(nèi)與降壓反射有關(guān)神經(jīng)元的放電增加。對(duì)降壓反射有興奮和抑制性反應(yīng)的49個(gè)神經(jīng)元中，完成升壓平臺(tái)期記錄的共19個(gè)。電針大鼠耳甲區(qū)穴位，9個(gè)放電頻率增加，凈增加率為138.00±18.76％。電針“內(nèi)關(guān)”穴，8個(gè)神經(jīng)元放電頻率增加，凈增加率為96.75±20.51％。電針“足三里”穴，8個(gè)神經(jīng)元放電頻率增加，凈增加率為100.75±31.87％。組間比

21、較顯示，電針三個(gè)穴位對(duì)神經(jīng)元的激活百分比無(wú)顯著差異(組間比較，one-way ANOVA，P>0.05)。
　　2針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)及NTS胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　觀察針刺不同穴位對(duì)正常麻醉大鼠胃內(nèi)壓的影響，及靜脈注射不同交感和副交感神經(jīng)受體業(yè)型激動(dòng)劑引起胃運(yùn)動(dòng)遲緩和亢進(jìn)狀態(tài)時(shí)針刺的效應(yīng)，并同步觀察NTS與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元在針刺調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)過(guò)程中放電活動(dòng)的變化，探討NTS中與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元在

22、針刺調(diào)節(jié)胃腸功能中的作用。
　　2.2實(shí)驗(yàn)方法:
　　實(shí)驗(yàn)選用健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠50只。實(shí)驗(yàn)前禁食12-18小時(shí)，手術(shù)及實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物體溫用動(dòng)物恒溫系統(tǒng)維持在37℃左右。大鼠麻醉后進(jìn)行頸靜脈、氣管插管，胃幽門(mén)部插入水囊連接壓力換能器以記錄胃內(nèi)壓，并監(jiān)測(cè)血壓、心率。
　　同步記錄胃內(nèi)壓及孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元，找到穩(wěn)定孤束核神經(jīng)元胞外放電后，記錄背景放電30s，然后分別電針、手針“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)

23、”、“中脘”、“足三里”四個(gè)穴位，同步觀察對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和孤束核神經(jīng)元細(xì)胞外放電的影響。對(duì)針刺有反應(yīng)的神經(jīng)元，分為5組，分別靜脈注射四種藥物和生理鹽水：β3體激動(dòng)劑BRL37344 Salt Hydrate4-8μ g/kg；β2受體激動(dòng)劑鹽酸克侖特羅0.05-0.1mg/kg；α2受體激動(dòng)劑可樂(lè)定0.4-0.8mg/kg；擬膽堿藥氨基甲酰膽堿0.2-0.4mg/kg和靜脈注射0.2ml0.9％的生理鹽水。上述藥物引起胃蠕動(dòng)遲緩或亢進(jìn)的同時(shí)，

24、NTS神經(jīng)元放電活動(dòng)發(fā)生興奮或抑制的同步變化，則鑒定為孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元。各組藥物注射后，繼續(xù)觀察針刺不同穴位對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元的影響。
　　2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　2.3.1生理狀態(tài)下針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和NTS胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　生理狀態(tài)下，麻醉大鼠的胃運(yùn)動(dòng)頻率為4-5次/min，波幅在50-100mmH2O。結(jié)果表明電針刺激“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”都能促進(jìn)麻醉大鼠胃蠕動(dòng)(P<0.

25、01)，而電針“中脘”穴則明顯減弱胃蠕動(dòng)(P<0.001)。手針效果與電針效果一致(independent t test，P>0.05)。
　　針刺過(guò)程共記錄133個(gè)NTS神經(jīng)元胞外放電，對(duì)針刺上述4個(gè)穴位有反應(yīng)的神經(jīng)元104個(gè)；靜脈注射β3受體激動(dòng)劑、β2受體激動(dòng)劑、α2受體激動(dòng)劑、擬膽堿藥有反應(yīng)的共45個(gè)，以下分組討論。在正常情況下，針刺對(duì)孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元放電的影響以抑制為主。針刺不同穴位對(duì)孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元的抑

26、制作用無(wú)明顯差異(one way ANOVA，LSD，P>0.05)
　　2.3.2使用β3受體激動(dòng)劑后針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和NTS相關(guān)神經(jīng)元活動(dòng)的影響
　　靜脈注射β3受體激動(dòng)劑后，藥物對(duì)胃運(yùn)動(dòng)抑制作用大約持續(xù)30-60min，胃運(yùn)動(dòng)蠕動(dòng)波波幅下降了10-20mmH2O，胃內(nèi)壓明顯降低，幅度為65.4±7.20mmH2O(P<0.001)。藥物后電針對(duì)胃運(yùn)動(dòng)沒(méi)有影響(P>0.05)。手針刺激“耳穴心”、“足三里”使胃內(nèi)壓增高(P<

27、0.05)；手針刺激“中脘”使胃內(nèi)壓降低(P<0.05)。與電針比較，手針“耳穴心”和“中脘”分別引起的胃運(yùn)動(dòng)的增強(qiáng)和抑制效應(yīng)更為顯著(P<0.05)，其余穴位不同刺激無(wú)明顯差異(independen t test，P>0.05)。
　　分別針刺4個(gè)穴位對(duì)β3受體激動(dòng)劑靜脈注射前后孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元放電的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(independen t test，P>0.05)。
　　2.3.2使用β2受體激動(dòng)劑后針刺對(duì)胃運(yùn)

28、動(dòng)和NTS相關(guān)神經(jīng)元電活動(dòng)的影響
　　靜脈注射β2受體激動(dòng)劑Clenbuterol(克倫布特羅)后，胃運(yùn)動(dòng)波幅明顯減低了10-20mmH2O，胃內(nèi)壓明顯下降，幅度為51.18±9.93 mmH2O(P<0.001)。電針刺激“耳穴心”使胃內(nèi)壓升高(P<0.05；電針刺激“內(nèi)關(guān)”、“中脘”、“足三里”對(duì)胃運(yùn)動(dòng)無(wú)作用(P>0.05)。手針刺激“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”能促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)(P<0.01)，手針“中脘”能抑制胃運(yùn)動(dòng)(P<0

29、.05)。手針“內(nèi)關(guān)”、“足三里”、“中脘”相比電針對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響作用更明顯。(independent t test，P<0.05)。
　　在Clenbuterol藥物引起胃運(yùn)動(dòng)抑制狀態(tài)，針刺不同穴位對(duì)藥物前后孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元的放電的影響無(wú)明顯差異(independen t test，P>0.05)。
　　2.3.3使用α2受體激動(dòng)劑后針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和NTS相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　靜脈注射α2受體激動(dòng)劑Cl

30、onidine后，胃運(yùn)動(dòng)的波幅降低了10-20mmH2O，胃內(nèi)壓明顯下降，幅度為79.07±24.59 mmH2O，持續(xù)30-60min(P<0.05)。藥物后電針、手針“耳穴心”、“足三里”能促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)(P<0.05)，在Clonidine藥物注射后引起胃運(yùn)動(dòng)遲緩狀態(tài)下，兩種刺激增強(qiáng)胃運(yùn)動(dòng)的作用無(wú)顯著差異。手針“中脘”能抑制胃運(yùn)動(dòng)且比電針的抑制作用更顯著(independen t test，P>0.05)。
　　針刺不同穴位對(duì)C

31、lonidine藥物靜脈注射前后孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元的放電的影響無(wú)明顯差異(independent t test，P>0.05)
　　2.3.4使用擬膽堿藥后針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)和NTS相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　靜脈注射擬膽堿藥氨基甲酰膽堿后，胃運(yùn)動(dòng)頻率明顯升高至6-7次/min，胃運(yùn)動(dòng)波幅升高了200-300mmH2O，胃內(nèi)壓明顯升高，幅度為121.27±29.53 mmH2O(P<0.01)。藥物注射前后，電針和于針“耳

32、穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”均能促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)(P<0.01，P<0.05，P<0.001)，電針和手針“中脘”均能抑制胃運(yùn)動(dòng)(P<0.01；P<0.01)。與電針相比較，在擬膽堿藥引起胃運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)狀態(tài)下，手針“耳穴心”和“中脘”的作用更顯著(independent t test，P<0.05)。
　　針刺不同穴位對(duì)擬膽堿藥?kù)o脈注射前后孤束核與胃運(yùn)動(dòng)相關(guān)神經(jīng)元的放電的影響無(wú)明顯差異(independent t test，P>0.05)。

33、靜脈注射上述四種交感和副交感受體業(yè)型激動(dòng)劑對(duì)針刺調(diào)節(jié)孤束核神經(jīng)元放電活動(dòng)無(wú)影響。
　　3針刺對(duì)NTS與CRD相關(guān)神經(jīng)元活動(dòng)的影響與針刺治療內(nèi)臟痛的機(jī)制
　　3.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>　　給予麻醉大鼠梯度的CRD條件刺激，鑒別NTS中CRD“點(diǎn)燃”(ON cell)型和“熄火”(OFF cell)型神經(jīng)元，觀察針刺作為檢驗(yàn)刺激對(duì)此類神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響，探討針刺在孤束核部位干預(yù)內(nèi)臟痛的中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)制。
　　3.2實(shí)驗(yàn)方法<

34、br>　　正常雄性SD大鼠，監(jiān)測(cè)心率、頸總動(dòng)脈血壓，記錄孤束核神經(jīng)元細(xì)胞外放電。大鼠經(jīng)肛門(mén)在直結(jié)腸放置長(zhǎng)度4-5cm左右的氣囊，通過(guò)壓力計(jì)隨機(jī)給予梯度為20、40、60、80mmHg的結(jié)直腸擴(kuò)張刺激(CRD)，同時(shí)用電生理單細(xì)胞記錄的方法記錄和鑒別孤束核對(duì)CRD刺激有反應(yīng)的相關(guān)神經(jīng)元，參照Fields等的研究大鼠RVM內(nèi)存在對(duì)傷害性熱刺激引起的甩尾反射相關(guān)的“熄滅”型(OFF cell)和“點(diǎn)燃”型(ON cell)神經(jīng)元，對(duì)梯度CRD

35、刺激產(chǎn)生遞增的興奮性反應(yīng)的神經(jīng)元，稱為“點(diǎn)燃”型(ON cell)，對(duì)梯度CRD刺激產(chǎn)生遞減的抑制性反應(yīng)的神經(jīng)元，稱為“熄火”型(OFF cell)。鑒別出NTS中CRD相關(guān)神經(jīng)元后，待放電恢復(fù)至基礎(chǔ)水甲，給予CRD刺激，NTS神經(jīng)元放電發(fā)生明顯“ON cell”或“OFFcell”型反應(yīng)時(shí)，給予2mA、10Hz持續(xù)30s的電針不同穴位的刺激，觀察針刺“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”在正常及CRD條件刺激引起NTS放電變化時(shí)對(duì)孤束核與C

36、RD“ON cell”型和“OFF cell”型神經(jīng)元的影響。
　　3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　3.3.1 NTS神經(jīng)元對(duì)梯度CRD刺激的反應(yīng)
　　本實(shí)驗(yàn)在57只大鼠共記錄到對(duì)CRD“ON cell”型神經(jīng)元21個(gè)。在CRD20、40、60、80mmHg條件刺激時(shí)，NTS神經(jīng)元放電由自發(fā)的205.52±30.12個(gè)/30s分別增加了21.10±5.23個(gè)/30s、56.79±11.93個(gè)/30s、86.17±13.38個(gè)/30

37、s、124.27±15.00個(gè)/30s(P<0.001，P<0.01，P<0.001，P<0.001)，為梯度增加反應(yīng)。
　　另外記錄到12個(gè)CRD“OFF cell”型神經(jīng)元。在CRD20、40、60、80mmHg條件刺激時(shí)，NTS神經(jīng)元放電由自發(fā)的196.67±42.36個(gè)/30S分別減少了25.82±13.43個(gè)/30s、72.72±14.77個(gè)/30s、112.91±22.37個(gè)/30s、146.83±29.83個(gè)/30s

38、(P<0.05，P<0.01，P<0.01，P<0.05)，為梯度抑制反應(yīng)。
　　此外記錄到2個(gè)對(duì)梯度CRD刺激產(chǎn)生先興奮后抑制，3個(gè)先抑制后興奮的神經(jīng)元，在本實(shí)驗(yàn)中未納入統(tǒng)計(jì)。
　　3.3.2電針對(duì)NTS與CRD相關(guān)神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響
　　CRD刺激對(duì)NTS產(chǎn)生“ON cell”型反應(yīng)的神經(jīng)元，CRD刺激前和CRD過(guò)程中電針“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”都以抑制反應(yīng)為主。如CRD前電針“耳穴心”放電減少了34.7

39、3±3.37個(gè)/30s(P<0.01)；CRD刺激過(guò)程電針“耳穴心”使放電減少了45.55±4.17個(gè)/30s(P<0.001)。
　　對(duì)CRD刺激產(chǎn)生“OFF cell”型反應(yīng)的神經(jīng)元，在CRD刺激前和CRD刺激過(guò)程中電針上述3個(gè)穴位都以興奮反應(yīng)為主。如CRD前電針“耳穴心”使放電增加了184.26±27.35個(gè)/30s(P<0.001)；CRD刺激時(shí)電針“耳穴心”使放電增加了130.14±28.23個(gè)/30s(P<0.01)。

40、
　　4結(jié)論:
　　孤束核內(nèi)存在升壓、降壓反射相關(guān)神經(jīng)元，這些神經(jīng)元可以分別被升壓、降壓反射興奮和抑制，表現(xiàn)為反應(yīng)的多樣性。在生理狀態(tài)下及PE引起的升壓平臺(tái)期，這些神經(jīng)元被“耳穴心”、“足三里”激活的百分比與“內(nèi)關(guān)”相比更為顯著；在降壓平臺(tái)期，這些神經(jīng)元被上述三個(gè)穴位激活的百分比無(wú)明顯差異，與其針刺降壓相應(yīng)相一致。這說(shuō)明NTS在針刺調(diào)節(jié)血壓過(guò)程中發(fā)揮重要的中樞整合作用，通過(guò)神經(jīng)信號(hào)交互調(diào)節(jié)(cross talk)的方式完成對(duì)

41、血壓的調(diào)節(jié)。
　　針刺不同穴位對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響不同，針刺“耳穴心”及與胃腸異節(jié)段的“足三里”、“內(nèi)關(guān)”能顯著增強(qiáng)胃運(yùn)動(dòng)，針刺與胃腸同神經(jīng)節(jié)段的“中脘”使胃運(yùn)動(dòng)減弱。使用交感神經(jīng)不同業(yè)型神經(jīng)受體激動(dòng)劑后，針刺對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響減弱；電針對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的作用不如于針顯著；而針刺不同穴位對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的影響也發(fā)生變化，“耳穴心”、“足三里”促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)的效果比“內(nèi)關(guān)”明顯。使用副交感神經(jīng)的擬膽堿藥物后，不同穴位對(duì)胃運(yùn)動(dòng)的作用與藥物前相比無(wú)明顯變化。NTS內(nèi)

42、存在與胃運(yùn)動(dòng)同步變化的神經(jīng)元，不同植物神經(jīng)受體激動(dòng)劑對(duì)此類神經(jīng)元的影響以興奮為主，介導(dǎo)了針刺“耳穴心”、“內(nèi)關(guān)”、“足三里”的胃運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)效應(yīng)和“中脘”的胃運(yùn)動(dòng)抑制的效應(yīng)，使用植物神經(jīng)受體激動(dòng)劑后針刺對(duì)此類神經(jīng)元的效應(yīng)與生理狀態(tài)下無(wú)顯著差異，以抑制NTS神經(jīng)元放電為主。
　　NTS與CRD刺激相關(guān)神經(jīng)元有兩類：第一類對(duì)梯度的CRD刺激產(chǎn)生興奮反應(yīng)，表現(xiàn)為神經(jīng)元胞外放電梯度增加，為“點(diǎn)燃”型神經(jīng)元(ON cell)；第二類對(duì)梯度的CR