rhBMP-2修飾的β-磷酸三鈣-膠原材料誘導(dǎo)成牙性能的初步研究.pdf

1、背景
　　 牙齒再生是再生醫(yī)學(xué)的一個(gè)重要分支，也是近年來(lái)口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。通過(guò)應(yīng)用組織工程學(xué)的原理與方法，研究者們已經(jīng)可以在動(dòng)物的頜骨內(nèi)再生出具有與天然牙完全相同組織結(jié)構(gòu)的牙齒。但要實(shí)現(xiàn)完整功能牙的再生，仍有很多困難需要克服。作為組織工程的三大要素之一，支架材料在組織工程的研究中具有非常重要的作用。適宜的支架材料能夠?yàn)榧?xì)胞提供附著、增殖、分化以及細(xì)胞外基質(zhì)形成的骨架，從而影響細(xì)胞的活動(dòng)。因此，尋找一種適用于牙組織工程的

2、支架材料對(duì)于完整功能牙的再生具有重要的意義。
　　 目的
　　 對(duì)已有納米β-磷酸三鈣/膠原材料進(jìn)行生物修飾，將修飾后的材料作為支架應(yīng)用于牙組織工程的研究中，初步探討其在牙組織工程中所發(fā)揮的作用，評(píng)價(jià)其作為牙組織工程支架材料的可行性。
　　 方法
　　 將納米級(jí)的β-磷酸三鈣(β-tricalciumphosphate，β-TCP)粉末與膠原(Collagen)在強(qiáng)堿性水溶液中復(fù)合，制作成β-磷酸三鈣/膠

3、原(β-TCP/COL)復(fù)合物，并與重組人BMP-2(recombinanthumanBMP-2，rhBMP-2)復(fù)合，制備牙組織工程支架材料。體視顯微鏡下分離新生SD鼠的下頜骨，取牙胚并將其消化成細(xì)胞懸液，與支架材料復(fù)合培養(yǎng)制備組織工程牙胚。通過(guò)掃描電鏡觀察、細(xì)胞黏附率測(cè)定和MTT測(cè)定細(xì)胞增殖情況來(lái)評(píng)價(jià)支架材料對(duì)牙胚細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響。將組織工程牙胚植入SD大鼠腎被膜下作為實(shí)驗(yàn)組，另分別植入單獨(dú)牙胚細(xì)胞團(tuán)塊(細(xì)胞對(duì)照組)及單獨(dú)支架材料

4、(材料對(duì)照組)作為對(duì)照，植入8w后取出標(biāo)本進(jìn)行大體觀察、組織學(xué)及免疫組織化學(xué)檢測(cè)。
　　 結(jié)果
　　 掃描電鏡示多孔β-TCP/COL支架材料呈疏松多孔狀，質(zhì)地柔軟，親水性良好；牙胚細(xì)胞可緊密貼附于材料，生長(zhǎng)狀態(tài)良好。牙胚細(xì)胞接種至支架材料上經(jīng)4、8、12h孵育后，細(xì)胞黏附率分別為27.20％±2.37％、44.52%±1.87％、73.81％±4.15％。MTT示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞增殖情況相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

5、.05)。植入物移植于大鼠腎被膜下8w后可見(jiàn)有白色鈣化物形成。實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)明顯的牙樣形態(tài)及典型的釉牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)形成，細(xì)胞對(duì)照組也可見(jiàn)釉質(zhì)和牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)，但排列相對(duì)紊亂；免疫組織化學(xué)結(jié)果證實(shí)了牙樣結(jié)構(gòu)中牙本質(zhì)涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein，DSPP)的存在。
　　 結(jié)論
　　 經(jīng)rhBMP-2修飾的β-TCP/COL支架材料與牙胚細(xì)胞生物相容性良好，作為一種納米級(jí)的生物活性支架材料，有希望成為