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文檔簡介
1、背景
牙齒再生是再生醫(yī)學(xué)的一個重要分支,也是近年來口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個研究熱點。通過應(yīng)用組織工程學(xué)的原理與方法,研究者們已經(jīng)可以在動物的頜骨內(nèi)再生出具有與天然牙完全相同組織結(jié)構(gòu)的牙齒。但要實現(xiàn)完整功能牙的再生,仍有很多困難需要克服。作為組織工程的三大要素之一,支架材料在組織工程的研究中具有非常重要的作用。適宜的支架材料能夠為細(xì)胞提供附著、增殖、分化以及細(xì)胞外基質(zhì)形成的骨架,從而影響細(xì)胞的活動。因此,尋找一種適用于牙組織工程的
2、支架材料對于完整功能牙的再生具有重要的意義。
目的
對已有納米β-磷酸三鈣/膠原材料進(jìn)行生物修飾,將修飾后的材料作為支架應(yīng)用于牙組織工程的研究中,初步探討其在牙組織工程中所發(fā)揮的作用,評價其作為牙組織工程支架材料的可行性。
方法
將納米級的β-磷酸三鈣(β-tricalciumphosphate,β-TCP)粉末與膠原(Collagen)在強(qiáng)堿性水溶液中復(fù)合,制作成β-磷酸三鈣/膠
3、原(β-TCP/COL)復(fù)合物,并與重組人BMP-2(recombinanthumanBMP-2,rhBMP-2)復(fù)合,制備牙組織工程支架材料。體視顯微鏡下分離新生SD鼠的下頜骨,取牙胚并將其消化成細(xì)胞懸液,與支架材料復(fù)合培養(yǎng)制備組織工程牙胚。通過掃描電鏡觀察、細(xì)胞黏附率測定和MTT測定細(xì)胞增殖情況來評價支架材料對牙胚細(xì)胞體外生長的影響。將組織工程牙胚植入SD大鼠腎被膜下作為實驗組,另分別植入單獨(dú)牙胚細(xì)胞團(tuán)塊(細(xì)胞對照組)及單獨(dú)支架材料
4、(材料對照組)作為對照,植入8w后取出標(biāo)本進(jìn)行大體觀察、組織學(xué)及免疫組織化學(xué)檢測。
結(jié)果
掃描電鏡示多孔β-TCP/COL支架材料呈疏松多孔狀,質(zhì)地柔軟,親水性良好;牙胚細(xì)胞可緊密貼附于材料,生長狀態(tài)良好。牙胚細(xì)胞接種至支架材料上經(jīng)4、8、12h孵育后,細(xì)胞黏附率分別為27.20%±2.37%、44.52%±1.87%、73.81%±4.15%。MTT示實驗組與對照組細(xì)胞增殖情況相似,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0
5、.05)。植入物移植于大鼠腎被膜下8w后可見有白色鈣化物形成。實驗組可見明顯的牙樣形態(tài)及典型的釉牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)形成,細(xì)胞對照組也可見釉質(zhì)和牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu),但排列相對紊亂;免疫組織化學(xué)結(jié)果證實了牙樣結(jié)構(gòu)中牙本質(zhì)涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)的存在。
結(jié)論
經(jīng)rhBMP-2修飾的β-TCP/COL支架材料與牙胚細(xì)胞生物相容性良好,作為一種納米級的生物活性支架材料,有希望成為
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