香桂化濁膠囊中桂皮醛的含量測定及藥動學(xué)研究.pdf

1、香桂化濁膠囊的處方為河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院臨床應(yīng)用多年的經(jīng)驗方，由肉桂、土大黃、廣藿香3種成分組成，具有芳香醒脾、清化濕濁之功效。臨床主治因各種疾病后邪留未盡、脾胃內(nèi)傷所致長期大便溏泄或有粘液、腹脹腸鳴、納呆或有低熱、舌苔白膩或白滑或見微黃、脈濡緩;主要用于慢性腸炎、真菌感染致腸炎證屬脾虛濕困的治療。國內(nèi)已有學(xué)者對其制劑工藝、質(zhì)量控制及毒理學(xué)進(jìn)行了系列研究報道。香桂化濁膠囊中起主要作用的化學(xué)成分為桂皮醛和百秋李醇。本課題在總結(jié)其研究工作的

2、基礎(chǔ)上，重點對香桂化濁膠囊中桂皮醛的成分進(jìn)行研究，對其含量測定以及入血后成分桂皮酸的血藥濃度和組織分布進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，從而期望實現(xiàn)對香桂化濁膠囊臨床應(yīng)用的有效性、科學(xué)性、合理性。
　　本研究課題采用了多種分析方法，比如高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)等對香桂化濁膠囊進(jìn)行了研究，在此基礎(chǔ)上建立了香桂化濁膠囊中桂皮醛的含量測定的方法，入血后成分桂皮酸的血藥濃度和組織分布的測定方法。
　　本課題

3、涉及到藥劑學(xué)，分析化學(xué)，藥動學(xué)等多學(xué)科領(lǐng)域，研究了香桂化濁膠囊中主要成分桂皮醛的含量測定，入血后成分桂皮酸的血藥濃度和組織分布的測定，為香桂化濁膠囊臨床應(yīng)用的有效性、科學(xué)性、合理性提供參考。
　　第一部分氣相色譜-質(zhì)譜法測定香桂化濁膠囊中桂皮醛的含量
　　目的:建立氣相色譜-質(zhì)譜法測定香桂化濁膠囊中桂皮醛含量，便于更好的控制香桂化濁膠囊的質(zhì)量。
　　方法:
　　1、氣相色譜-質(zhì)譜條件:HP-5彈性石英毛細(xì)管色譜柱

4、(30 m×0.25mm，0.25μm);載氣:He，流速:1.0 mL·min-1，分流比:50∶1;采用程序升溫，進(jìn)樣口溫度:230℃，進(jìn)樣量:1.0μL;離子源:電子轟擊(EI)離子源，離子源溫度:230℃，電子能量:70eV;柱前壓65.072 kpa;四級桿質(zhì)量分析器。
　　2、方法學(xué)考察:分別對方法的系統(tǒng)適用性、專屬性、線性關(guān)系、檢測限和定量限，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性以及加樣回收率進(jìn)行了考察。
　　3、桂皮醛含量

5、測定:制備3批供試品溶液進(jìn)樣測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算香桂化濁膠囊中桂皮醛的含量。
　　結(jié)果:
　　1、方法學(xué)考察:香桂化濁膠囊中桂皮醛和其他成分的分離度良好，理論塔板數(shù)＞50000;在0.02～4.00 mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程Y=281786X+2E+06，相關(guān)系數(shù)為0.9994;最低檢測限為0.75μg·mL-1，定量限為2.51μg·mL-1;精密度試驗計算桂皮醛的色譜峰峰面積RSD為1.64％，表

6、明該方法精密度良好;穩(wěn)定性試驗計算桂皮醛色譜峰峰面積的RSD為1.76％，表明桂皮醛供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定;重復(fù)性試驗計算桂皮醛的含量，算得RSD為1.81％，表明該方法的重現(xiàn)性良好;計算桂皮醛的平均加樣回收率為96.2％，RSD為2.11％。
　　2、樣品含量測定:以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算香桂化濁膠囊中桂皮醛的含量，以每粒膠囊0.39 g裝量計，暫定本品每粒含桂皮醛不得少于0.48 mg。
　　結(jié)論:采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對香

7、桂化濁膠囊中的桂皮醛含量進(jìn)行測定，該方法操作簡便，重現(xiàn)性好、專屬性強、準(zhǔn)確可靠，適用于香桂化濁膠囊中桂皮醛的含量測定。
　　第二部分香桂化濁膠囊中桂皮醛在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究
　　目的:本實驗通過采用HPLC法對灌胃給藥香桂化濁膠囊后大鼠體內(nèi)桂皮酸的血藥濃度進(jìn)行研究，采用適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)處理方式對所得圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行合理的分析，以提高藥物臨床治療的合理性、有效性。
　　方法:
　　1、液相色譜條件的考察:考察了不同的流動

8、相、不同波長以及柱溫等因素對測定的影響，來確定合適的色譜條件。
　　2、方法學(xué)考察:分別對方法的系統(tǒng)適用性、專屬性、線性關(guān)系、檢測限和定量限，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性以及加樣回收率進(jìn)行了考察。
　　3、桂皮酸在大鼠體內(nèi)血藥濃度測定:測定桂皮酸在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，并繪制平均血藥濃度-時間曲線，計算算出藥代動力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果:
　　1、液相色譜條件的考察:Diamonsil TM C18(250×4.6 mm，5

9、μm)色譜柱;流動相:甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸;檢測波長:270 nm;流速:1.0mL·min-1;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20μL;靈敏度:1.0 AUFS。
　　2、方法學(xué)考察:經(jīng)HPLC分析理論塔板數(shù)按桂皮酸峰計算不低于8000，桂皮酸與其他峰的分離度大于1.5;經(jīng)測定空白血漿對桂皮酸的分析測定無影響;血漿中桂皮酸的質(zhì)量濃度為0.2～160μg·mL-1時，桂皮酸的峰面積Y與桂皮酸質(zhì)量濃度X(μg·mL-1)呈良好的線性關(guān)系

10、(r=0.9994)，回歸方程為:Y=27.086X+0.503;桂皮酸最低檢測限為0.15μg·mL-1，以S/N=10計，計算桂皮酸定量限為0.2μg·mL-1,精密度試驗計算桂皮酸的色譜峰峰面積RSD值分別為2.87％，1.70％，0.48％，表明該方法精密度良好;穩(wěn)定性試驗計算桂皮酸色譜峰峰面積的RSD為2.4％，0.25％，1.01％，表明桂皮酸樣品穩(wěn)定性良好;計算桂皮酸的回收率在規(guī)定范圍之內(nèi)，符合要求。
　　3、桂皮酸

11、在大鼠體內(nèi)血藥濃度測定:桂皮酸在大鼠體內(nèi)的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)符合一級吸收雙室模型。Tmax為15.6 min，t1/2β為11.077 min，
　　結(jié)論:本文采用HPLC法，以桂皮酸為參照峰，對色譜條件進(jìn)行了篩選，經(jīng)系列方法學(xué)考察，結(jié)果均符合生物樣品測定的要計算，可用于大鼠體內(nèi)藥動學(xué)的研究。桂皮醛進(jìn)入體內(nèi)很快代謝為桂皮酸，約半個小時血藥濃度達(dá)到峰值，并很快隨時間逐漸降低。桂皮酸血漿藥-時曲線呈二室模型，由藥代動力學(xué)參數(shù)表可見，桂

12、皮酸在體內(nèi)的分布、消除半衰期較短，說明桂皮酸在體內(nèi)的吸收、分布較快，口服給藥能很快達(dá)到有效濃度。該方法操作簡便，分析速度快，靈敏度高，適用于口服香桂化濁膠囊后桂皮酸的血藥濃度測定。
　　第三部分香桂化濁膠囊中桂皮醛在大鼠體內(nèi)組織分布研究
　　目的:本實驗通過采用HPLC法對灌胃給藥香桂化濁膠囊后大鼠體內(nèi)桂皮酸的各組織分布進(jìn)行研究，，采用適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)處理方式對所得圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行合理的分析，以提高藥物臨床治療的合理性、有效性。

13、>　　方法:
　　1、液相色譜條件的考察:考察了不同的流動相、不同的波長以及柱溫等因素對測定的影響，來確定適合的色譜條件。
　　2、方法學(xué)考察:對不同組織，分別對方法的系統(tǒng)適用性、專屬性、線性關(guān)系、檢測限和定量限，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性以及加樣回收率進(jìn)行了考察。
　　3、桂皮酸在大鼠體內(nèi)組織分布的研究:測定桂皮酸在大鼠血漿、肝、腎、心、肺、腎、胃各組織分布，由此分析桂皮醛進(jìn)入體內(nèi)后代謝為桂皮酸后的過程。
　　結(jié)果

14、:
　　1、液相色譜條件的考察:Diamonsil TM C18(250×4.6 mm，5μm)色譜柱;流動相:甲醇-乙腈-0.1％冰醋酸;檢測波長:270 nm;流速:1.0mL·min-1;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20μL;靈敏度:1.0 AUFS。
　　2、方法學(xué)考察:經(jīng)HPLC分析各組織理論塔板數(shù)按桂皮酸峰計算分別不低于8000，桂皮酸與其他峰的分離度大于1.5;空白組織對桂皮酸的分析測定無影響;經(jīng)分析各組織中桂皮酸的質(zhì)

15、量濃度為0.4～600μg·mL-1時，桂皮酸的峰面積Y與桂皮酸質(zhì)量濃度X(μg·mL-1)呈良好的線性關(guān)系。各組織標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程分別如下，血漿:Y=27.086 X+0.503，r=0.9994;肝:Y=0.4289 X-0.241,r=0.9999;腎:0.4963 X+0.3823,r=0.9996;心:Y=0.737 X+0.7353,r=0.9999;肺: Y=0.7284 X+0.3886,r=0.9999;脾:0.711

16、5 X+0.4163, r=0.9997;胃:Y=0.7061 X+0.1322，r=0.9995。各組織總桂皮酸的最低檢測限均為0.15μg·mL-1，定量限均為0.25μg·mL1;精密度試驗計算各組織中低、中、高三種濃度的桂皮酸色譜峰峰面積RSD如下，血漿:2.87％，1.70％，0.48％;肝:2.54％，1.46％,1.02％;腎:2.35％,1.69％,1.21％;心:1.28％,2.43％,2.18％;肺:2.50％,1.

17、70％,2.01％;脾:1.19％,1.84％,0.46％;胃:2.36％,2.46％,1.27％。穩(wěn)定性試驗計算各組織中低、中、高三種濃度的桂皮酸色譜峰峰面積RSD如下，血漿:2.4％，0.25％，1.01％;肝:1.48％，0.83％，1.87％;腎:2.04％,1.94％,1.45％;心:1.15％,1.94％,2.10％;肺:2.08％,1.86％,1.93％;脾:2.52％，1.97％，1.20％;胃:2.25％，2.25％，

18、1.46％。回收率試驗計算各組織中低、中、高三種濃度的桂皮酸色譜峰峰面積RSD如下，血漿:99.96％，99.63％，106.55％;肝:86.74％，97.07％，101.92％;腎:87.22％,103.45％,97.93％;心:99.68％,94.17％,97.72％;肺:90.46％,92.39％,95.37％;脾:87.63％,100.52％,101.29％;胃:87.85％,103.22％,98.01％。
　　3、桂皮

19、酸的組織分布:腦組織中無法檢測到桂皮酸，而在肝、腎、心、肺、脾、胃中均能檢測到桂皮酸成分的存在，從藥時曲線圖可以看出各組織藥物含量分布為:胃＞肺＞肝＞腎＞脾＞心。
　　結(jié)論:從桂皮酸組織分布測定結(jié)果來看，藥物中的桂皮醛成分進(jìn)入體內(nèi)很快代謝為桂皮酸，并且濃度很快隨時間逐漸降低，約5個小時消除完全，說明桂皮酸在體內(nèi)的吸收、分布均較快。心樣品中的桂皮酸代謝相比較其他組織最快，桂皮酸在肺中持續(xù)的時間最長。本文采用HPLC法，以桂皮酸為參照