酵母表達(dá)鮭魚(yú)降鈣素結(jié)腸定位緩釋膠囊的制備及藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、降鈣素(CT)是由32個(gè)氨基酸組成的一種多肽類(lèi)激素。在不同種屬來(lái)源的降鈣素中，以鮭魚(yú)降鈣素活性最高，它通過(guò)抑制破骨細(xì)胞的活性，減少骨鈣丟失，從而降低血鈣含量，同時(shí)具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。但由于其相對(duì)分子質(zhì)量小，容易被胃腸道內(nèi)存在的大量多肽及蛋白質(zhì)水解酶降解，還有胃腸道內(nèi)的低PH值環(huán)境和肝臟的首關(guān)效應(yīng)，導(dǎo)致鮭魚(yú)降鈣素口服給藥的生物利用度較低(一般小于10％)。因此，為了提高鮭魚(yú)降鈣素的生物利用度，本研究采用亞微粒載藥體系和結(jié)腸定位的原理，以天

2、然聚合物作為藥物載體，聯(lián)合應(yīng)用生物黏附劑等材料，以促進(jìn)鮭魚(yú)降鈣素的口服吸收。
　　 本實(shí)驗(yàn)以重組鮭魚(yú)降鈣素酵母為原料，以β-環(huán)糊精、阿拉伯膠為壁材，羥丙甲纖維素和卡波姆為生物黏附劑，通過(guò)噴霧干燥法制備了重組鮭魚(yú)降鈣素酵母微球，并以市售的結(jié)腸溶空心膠囊為定位載體，將其制成每顆膠囊50mg，12h緩釋的結(jié)腸定位膠囊。使藥物與結(jié)腸黏膜表面直接接觸，提高局部濃度，同時(shí)增加藥物與結(jié)腸的接觸時(shí)間，提高生物利用度，降低毒副作用。
　　

3、 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，首先建立了酵母表達(dá)鮭魚(yú)降鈣素結(jié)腸定位緩釋微球膠囊的體外分析方法。在處方因素中，重點(diǎn)考察了壁材的種類(lèi)及用量、生物黏附劑的比例以及芯材比例等對(duì)膠囊體外釋放的影響，最終得到緩釋膠囊的最佳處方；在對(duì)工藝的考察中，首先通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，考察了噴霧干燥進(jìn)風(fēng)溫度、出風(fēng)溫度、進(jìn)料速度、霧化壓力等因素對(duì)膠囊體外釋放的影響，得出適宜的操作范圍；在此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了正交實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，得出了最佳的噴霧條件：進(jìn)風(fēng)溫度160℃、進(jìn)料速

4、度10mL·min-1、霧化壓力0.5MPa。在此條件下，所得膠囊能達(dá)到緩釋12 h的試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求，并且確定了符合設(shè)計(jì)要求的重組鮭魚(yú)降鈣素酵母緩釋膠囊的最佳處方和制備工藝。此外，采用優(yōu)化條件制備了三批樣品，以檢驗(yàn)處方和工藝的重現(xiàn)性并對(duì)膠囊進(jìn)行了初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?？疾炝宿D(zhuǎn)籃速度、粒徑大小等對(duì)膠囊中藥物釋放的影響。
　　 本文采用Tsuruoka法制備高鈣血大鼠模型，觀察給藥后血漿鈣濃度的變化。隨機(jī)分組單劑量給藥試驗(yàn)設(shè)計(jì)單劑量口服重組

5、鮭魚(yú)降鈣素酵母緩釋膠囊0.5g·kg-1和肌肉注射密鈣息(Miacalcic，Mia)100 IU·kg-2進(jìn)行了藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)血藥濃度，DAS2.0藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算出相應(yīng)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，t檢驗(yàn)比較兩種制劑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明，ρο重組鮭魚(yú)降鈣素酵母緩釋膠囊0.5，1g·kg-1，iv帕米磷酸二鈉(pamidronate，Pam)5 mg·kg-1，im Mia100/IU·kg-1均有明顯降低血漿鈣濃度的

6、作用，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，三者藥后1h的血鈣變化率差異無(wú)顯著性。四參數(shù)回歸方程為：OD=-7E-07C3+0.0003C2+0.0073C-0.0761(r=0.9985)，檢測(cè)范圍為5-200μg·L-1，最低檢測(cè)限為5μg·L-1，日內(nèi)和日間RSD小于8.60％，單劑量口服重組鮭魚(yú)降鈣素酵母緩釋膠囊、肌肉注射Mia，Tmax分別為(3.01±0.57)，(0.99±0.30)h；Cmax為(107.25±20.03)，(131.83±26

7、.96)μg·L-1；T1/2α為(2.30±0.38)，(0.07±0.22)h；T1/2β為(3.85±0.68)，(2.50±0.51)h；Ka為(0.42±0.23)，(14.26±0.21)h-1；AUC0-t為(800.72±131.36)，(601.29±112.02)μg·h·L-1；AU0-∞為(861.31±158.65)，(617.06±130.27)μg·h·L-1；MRT0-t為(5.46±1.071)，(4.