巨細(xì)胞病毒對(duì)心臟移植后急性排斥反應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 小鼠腹部異位心臟移植模型的建立
　　 目的:掌握小鼠腹部心臟移植術(shù)的手術(shù)技巧及對(duì)并發(fā)癥的預(yù)防和處理,成功建立小鼠腹部心臟移植模型,以探討器官移植免疫學(xué)病變發(fā)病機(jī)制及進(jìn)行干預(yù)研究。方法:BALB/c小鼠為受體、C57BL/6小鼠為供體行小鼠腹部心臟移植,采用大鼠Ono術(shù)式進(jìn)行小鼠腹部異位心臟移植,小鼠供體升主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端側(cè)吻合,供體肺動(dòng)脈與受體下腔靜脈吻合。術(shù)后小鼠隨機(jī)分為兩組。A組(n=15):無(wú)任何干預(yù);根據(jù)

2、術(shù)后觀察目的不同分為兩各亞組,A1(n=9)術(shù)后3、5、7天分別處死3只病理學(xué)觀察移植心臟排斥情況,A2(n=6)觀察移植心臟存活時(shí)間。B組(n=15):術(shù)后當(dāng)天環(huán)胞素A(CsA)20mg/kg,每日一次。根據(jù)術(shù)后觀察目的不同分為兩各亞組,B1(n=9)術(shù)后3、5、7天分別處死3只病理學(xué)觀察移植心臟排斥情況,B2(n=6)觀察移植心臟存活時(shí)間。
　　 結(jié)果:實(shí)際手術(shù)34例,成功30例,成功率88.2％(30/34)。術(shù)后3、5、

3、7日病理學(xué)結(jié)果A1組排斥反應(yīng)程度較同時(shí)間B1組排斥反應(yīng)重,未給予任何干預(yù)小鼠的異體移植心臟術(shù)后7天的急性排斥病理學(xué)分級(jí)可達(dá)Ⅳ級(jí)。兩組小鼠移植后心臟存活時(shí)間比較,給予CsA小鼠的移植心臟存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。
　　 結(jié)論:熟練掌握顯微外科技術(shù),能夠成功建立小鼠腹腔異位心臟移植模型,其病理改變類似于人類移植物急性排斥病變的病變特點(diǎn)。此模型可用于移植物急性排斥病變發(fā)病機(jī)制和防治措施的進(jìn)一步研究。
　　 第二部分 巨細(xì)胞病毒對(duì)小鼠心

4、臟移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的影響
　　 目的:觀察巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染對(duì)同種異基因小鼠腹腔異位移植心臟急性排斥反應(yīng)的影響。
　　 方法:BALB/c小鼠80只,C57BL/6小鼠40只,按供、受鼠基因不同分為3組(每組20對(duì)):同基因移植組(A組BALB/c→BALB/c)、CsA組(B組C57BL/6→BALB/c)和CsA+MCMV干預(yù)組(C組C57BL/→BALB/c),施行小鼠腹腔

5、異位心臟移植術(shù)。A組無(wú)藥物干預(yù),B組術(shù)后腹腔注射注射CsA 20mg/kg.d,C組除腹腔注射CsA 20mg/kg.d外,術(shù)后第一天腹腔接種104PFU MCMV0.2ml。按實(shí)驗(yàn)計(jì)劃,每組各分為兩個(gè)亞組,術(shù)后10天處死為第一亞組,取出移植心臟,病理學(xué)觀察排斥反應(yīng)程度。第二亞組觀察移植心臟存活時(shí)間。
　　 結(jié)果:術(shù)后10天,A1組移植心臟幾乎無(wú)排斥反應(yīng),C1移植心臟急性排斥反應(yīng)分級(jí)明顯高于B1組(P＜0.01);C2組移植心臟

6、存活時(shí)間明顯低于B2組(P＜0.01),而A2組移植心臟長(zhǎng)期存活(觀察60天)。
　　 結(jié)論:巨細(xì)胞病毒感染加速小鼠腹腔異位移植心臟急性排斥反應(yīng)。
　　 第三部分 巨細(xì)胞病毒加速心臟移植急性排斥反應(yīng)的機(jī)制:細(xì)胞因子的上調(diào)?
　　 目的:研究巨細(xì)胞病毒感染加速小鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)的機(jī)制。
　　 方法:BALB/c小鼠為受體,C57BL/6小鼠為供體,建立同種異基因小鼠腹部異位心臟移植模型。術(shù)后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

7、分為3組:A組低劑量CsA組;B組低劑量CsA+MCMV干預(yù)組;C組高劑量CsA+MCMV干預(yù)組。每組根據(jù)觀察目的不同分為兩個(gè)亞組。術(shù)后觀察各組小鼠的一般情況、各組第二亞組移植心臟存活時(shí)間,受體小鼠存活時(shí)間,各組第一亞組移植術(shù)后10天ELISA檢測(cè)外周血中細(xì)胞因子RANTES、干擾素-γ(IFN-γ)、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1(MIP-1)水平,RT-PCR檢測(cè)脾臟RANTES mRNA、IFN-γ mRNA、MIP-1 mRNA的表達(dá),以

8、及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟CD4+、CD8+T細(xì)胞比例并計(jì)算CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的比值(CD4+/CD8+),Real Time PCR檢測(cè)B1組、C1組移植心肌及自體心肌MCMV載量,光鏡下觀察移植心臟的病理組織學(xué)急性排斥分級(jí)。
　　 結(jié)果:B2組心臟存活時(shí)間較A2組明顯縮短,而C2組較其他2組小鼠存活時(shí)間明顯縮短。術(shù)后10天,B1組移植心臟急性排斥反應(yīng)最重,C1組移植心臟急性排斥反應(yīng)最輕。外周血中細(xì)胞因子RANTES、I

9、FN-γ、MIP-1水平,脾臟RANTESmRNA、IFN-γ mRNA、MIP-1 mRNA的表達(dá),以及脾臟CD4+、CD8+T細(xì)胞比例B1組比A1組明顯升高,C1組則最低。B1組移植心肌MCMV載量顯著高于自體心肌,C1組無(wú)論移植心機(jī)和自體心肌MCMV載量均明顯高于B1組。
　　 結(jié)論:CMV感染引起急性排斥反應(yīng)機(jī)制是由于細(xì)胞因子的上調(diào),加強(qiáng)免疫細(xì)胞聚集和活化功能;CMV感染引起急性排斥反應(yīng)的前體是機(jī)體尚存一定免疫功能,當(dāng)其