柿子單寧的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)及其與幾種蛇毒蛋白的相互作用研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩153頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、本文采用無(wú)水甲醇為提取溶劑從柿子果肉中提取單寧,通過(guò)考察提取劑種類、提取溫度、時(shí)間、提取次數(shù)及料液比等因素來(lái)確定了柿子單寧的最佳提取工藝;采用大孔樹(shù)脂101結(jié)合超濾分離實(shí)現(xiàn)了柿子單寧的分離純化及分級(jí)制備,得到了高分子量單寧(HMWT)和小分子量單寧(SMWT)兩個(gè)級(jí)分。采用高效液相-電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-ESI-MS)對(duì)小分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定;采用凝膠滲透色譜(GPC)、傅立葉紅外光譜(FT-IR)以及硫解和酸解結(jié)合HPLC-ES

2、I-MS等方法分析了HMWT分子量分布以及單體結(jié)構(gòu);并對(duì)HMWT與SMWT在不同體系中的的抗氧化活性及HMWT與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用進(jìn)行了系統(tǒng)研究;同時(shí)重點(diǎn)研究了HMWT在體外對(duì)江浙蝮蛇毒(AhPVP)、尖吻蝮蛇毒(AaVP)、眼鏡蛇毒(NnaVP)中蛋白酶活的抑制能力及體內(nèi)對(duì)AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的解毒效果;并結(jié)合SDS-PAGE凝膠電泳、紅外光譜(FT-IR)、圓二色譜(CD)初步研究了HMWT與蛇毒蛋

3、白的相互作用機(jī)理。主要研究結(jié)果如下:
   1.柿子單寧的最佳提取工藝為:新鮮果肉去皮打漿后,以含1%HCL的無(wú)水甲醇作為提取介質(zhì),料液比1:12,90℃加熱回流提取,提取3次,每次40min。
   2.提取液經(jīng)大孔樹(shù)脂101除糖去雜,聚砜超濾膜分級(jí)得到紅色的HMWT粉末以及淡黃色SMWT粉末,HMWT縮合單寧(CT)含量93.4%,SMWT總酚(TP)含量為87.4%。兩者具有典型的酚類物質(zhì)顯色特征,易溶于水,乙醇,

4、甲醇等溶劑,其中HMWT在水中的最大溶解度為100mg/mL。
   3.經(jīng)HPLC-ESI-MS鑒定SMWT主要為沒(méi)食子酸及分子量分別為461,461,603的三個(gè)未知化合物。HMWT分子量分布在1.16×104u-1.54×1.04u之間,重均分子量1.39×104u,數(shù)均分子量1.28×104u,FT-IR表明HMW工具有原花青素的基本骨架結(jié)構(gòu),硫解和酸解的HPLC-ESI-MS表明其主要組成單體為:表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸

5、酯(EGCG),表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG),(表)沒(méi)食子兒茶素(E)GC及一種未知結(jié)構(gòu)的單體。
   4.HMWT在2-脫氧-D-核糖體系,甲基紫體系,水楊酸體系中對(duì)羥基自由基的最大抑制率分別為90.47%、96.46%和87.77%;對(duì)鄰苯三酚自氧化以及亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧比的最大抑制能力分別為56.57%和69.63%。在所有的體系中HMWT的抗氧化能力與加入量呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系,且HMWT的抗氧化能力要優(yōu)于相同濃度下的葡萄籽

6、原花青素,大大強(qiáng)于SMWT,是柿子單寧抗氧化作用的主導(dǎo)成分。
   5.HMWT與明膠和BSA均具有較強(qiáng)的結(jié)合能力,明膠、BSA與HMWT質(zhì)量比達(dá)到1.6:1時(shí)單寧沉淀率達(dá)到最大。HMWT與BSA結(jié)合的適宜條件為:溫度40℃,反應(yīng)時(shí)間30min,體系pH5.0,0.5mol/L的NaH2PO4為溶解介質(zhì)。熒光光譜和紫外吸收光譜法分析表明,HMWT可以有規(guī)律地使BSA內(nèi)源熒光猝滅,其猝滅機(jī)理可認(rèn)為是HMWT與BSA形成復(fù)合物的靜態(tài)

7、猝滅、HMWT與BSA的作用力為疏水作用力和靜電作用力,同時(shí)由F(o)rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論計(jì)算得出HMWT與BSA結(jié)合位置的距離為1.63nm,結(jié)合位點(diǎn)0.99。
   6.HMWT溶液在光照、溫度大于60℃、pH大于7條件下穩(wěn)定性較差;具有較好的抗氧化性和抗還原性;食品添加劑中β-環(huán)狀糊精有利于增加HMWT的熱穩(wěn)定性、淀粉在溶液中含量超過(guò)0.5%時(shí)易與HMWT發(fā)生復(fù)合作用,檸檬酸三鈉對(duì)穩(wěn)定性有較大的影響,檸檬酸、EDT

8、A則影響較小;金屬離子中Fe3+,AL3+,Zn2+對(duì)HMWT有著較強(qiáng)的結(jié)合作用,Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cu2+則影響較小。
   7.當(dāng)蛇毒蛋白與HMWT質(zhì)量比為1:1時(shí),HMWT對(duì)AhPVP、AaVP、NnaVP中蛋白質(zhì)水解酶、磷脂酶A2、L-氨基酸氧化酶、精氨酸酯酶、乙酰膽堿酯酶、類凝血酶的酶活均基本完全抑制,且呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。
   8.HMWT對(duì)昆明小鼠腹腔注射的LD50值為301.84mg/

9、kg,具有良好的安全性。當(dāng)蛇毒蛋白與HMWT質(zhì)量比為1:1時(shí),HMWT對(duì)AhPVP,AaVP,NnaVP引起的肌肉毒性有極顯著(p<0.01)的抑制作用,肌酸激酶(CK)的酶活抑制率分別為63.30%,55.06%,61.82%,肌肉組織病理學(xué)觀察也顯示出明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系,高劑量組小鼠肌纖維損傷明顯好轉(zhuǎn)。當(dāng)蛇毒蛋白與HMWT質(zhì)量比為1:1時(shí),HMWT能夠極顯著(p<0.01)降低AhPVP,AaVP引起的皮下出血,出血抑制率分別為98

10、.6%,96.9%,HMWT對(duì)出血的抑制呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。
   9.5LD50劑量的AhPVP、AaVP、NnaVP注射入昆明小鼠腹腔后,口服灌胃HMWT后可使AhPVP、AaVP和NnaVp所致的染毒死亡小鼠平均存活時(shí)間分別延長(zhǎng)4-6倍、3.5倍和2-4倍,高劑量的HMWT可使AhPVP、AaVP和NnaVp所致的染毒小鼠存活率分別提高到75%、50%和25%。
   腹腔注射HMWT后可使AhPVP、AaVP和

11、NnaVp所致的染毒死亡小鼠平均存活時(shí)間分別延長(zhǎng)15-30倍、15-20倍和5-15倍,高劑量組對(duì)各種蛇毒的解毒作用強(qiáng),小鼠存活率達(dá)100%。靜脈注射HMWT對(duì)小鼠的急救效果最佳,HMWT中劑量組即可使各組小鼠存活率達(dá)100%,低劑量組也能大大延長(zhǎng)存活時(shí)間并且存活率分別達(dá)到了50%、75%、50%。三種解救方式對(duì)蛇毒引起的毒害均有急救效果,口服灌胃雖然存活率不高但能有效的延長(zhǎng)存活時(shí)間,而腹腔注射和靜脈注射則能有效提高存活率。
  

12、 口服預(yù)防給藥HMWT可使AhPVP、AaVP和NnaVp所致的染毒死亡小鼠平均存活時(shí)間分別延長(zhǎng)3-5倍、3-5倍和1-3倍,說(shuō)明服用HMWT對(duì)蛇毒引起的毒害有一定的預(yù)防作用。
   10.SDS-PAGE結(jié)果表明HMWT與蛇毒蛋白結(jié)合形成沉淀是導(dǎo)致酶失活的重要因?yàn)?雖然HMWT對(duì)蛇毒中蛋白質(zhì)組分的結(jié)合表現(xiàn)出一定的非特異性,但對(duì)不同組分結(jié)合能力和選擇性明顯不同,且為非可逆結(jié)合。AhPVP經(jīng)Sephadex G-75兩次純化及D

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論