PPARδ激動劑和siRNA對大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞及成骨細(xì)胞分化和礦化的作用研究.pdf

1、目的：探討過氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)δ激動劑GW501516和siRNA對大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向成脂和成骨方向分化的作用，以及對原代成骨細(xì)胞的分化和礦化的作用。以探討PPARδ在骨量調(diào)控和骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)制中的作用，從而為骨質(zhì)疏松癥的治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：①選取3W齡雄性SD大鼠，無菌條件下取股骨干骨髓組織，過濾后使用全骨髓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠原代BMSCs，后采用差速貼壁法純化細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀檢

2、測其細(xì)胞表面標(biāo)志物(CD29，CD90，CD11b，CD45)來鑒定BMSCs。②將P3代BMSCs隨機(jī)分為對照組、PPARδ激動劑組和siRNA干擾組，分別使用成骨誘導(dǎo)液及成脂誘導(dǎo)液進(jìn)行成骨和成脂方向誘導(dǎo)培養(yǎng)，熒光定量PCR檢測成骨細(xì)胞分化標(biāo)志物（堿性磷酸酶、骨鈣素）和脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志物（脂肪酸結(jié)合蛋白2、脂連素）mRNA的表達(dá)，油紅O染色檢測脂肪細(xì)胞分化，茜素紅染色檢測成骨細(xì)胞礦化能力。③原代成骨細(xì)胞在含有抗壞血酸的α-MEM培養(yǎng)液

3、培養(yǎng)，隨機(jī)分為對照組、PPARδ激動劑組和siRNA干擾組，熒光定量PCR檢測成骨細(xì)胞分化標(biāo)志物（ALP和骨鈣素）的表達(dá),茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)。
　　結(jié)果：①BMSCs細(xì)胞成梭形，排列呈漩渦狀或瀑布狀，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物，細(xì)胞表面高表達(dá)CD29、CD90，低表達(dá)CD11b、CD45。②與對照組相比，PPARδ激動劑組中BMSCs的成骨細(xì)胞方向分化標(biāo)志物表達(dá)增加，BMSCs向脂肪細(xì)胞方向分化標(biāo)志物表達(dá)減少。茜素紅染色

4、顯示PPARδ激動劑組細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)較對照組增加，油紅O染色顯示PPARδ激動劑組脂肪小滴明顯減少。siRNA干擾組向成骨細(xì)胞方向分化標(biāo)志物表達(dá)減少，向脂肪細(xì)胞方向分化標(biāo)志物表達(dá)增加。茜素紅染色顯示siRNA干擾組細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)較對照組減少，油紅染色顯示siRNA干擾組脂肪小滴明顯增加。③原代成骨細(xì)胞呈三角形或多邊形，細(xì)胞排列呈鋪路石樣改變，PPARδ激動劑組較對照組礦化結(jié)節(jié)明顯增多，成骨細(xì)胞分化標(biāo)志物的表達(dá)（ALP和骨鈣素）增加。siRN