尼洛替尼治療伊馬替尼療效欠佳的慢性髓性白血病患者的療效分析凝血因子V缺乏癥中凝血因子V的突變基因分析及功能驗證.pdf

1、第一部分：
　　目的：比較伊馬替尼療效欠佳的慢性髓性白血病（CML）患者，繼續(xù)使用伊馬替尼或轉(zhuǎn)換為尼洛替尼治療后的療效及安全性。
　　方法：收集對伊馬替尼療效欠佳的45例患者，分為繼續(xù)使用伊馬替尼組及尼洛替尼轉(zhuǎn)化組，其中又將尼洛替尼轉(zhuǎn)化組分為早期轉(zhuǎn)換與晚期轉(zhuǎn)換組。其中伊馬替尼組有22人，早期尼洛替尼轉(zhuǎn)化組有7人，晚期尼洛替尼組轉(zhuǎn)化有16人。其中早期轉(zhuǎn)化與晚期轉(zhuǎn)化組的23例患者接受尼洛替尼的劑量均為400mg，q12h，所有患

2、者均在治療過程中隨訪觀察，首診時測定Sokal評分，定期監(jiān)測血液學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子學(xué)緩解情況（FISH和RQ-PCR），并對患者用藥后的基本情況、臨床表現(xiàn)及不良反應(yīng)進(jìn)行記錄。
　　結(jié)果：45例患者的中位病程為45（13-124）個月，其中23例尼洛替尼組的中位尼洛替尼治療時間為17（4-62）個月。45例患者中對比已達(dá)到完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解的慢性期患者與未達(dá)到完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解的患者，已達(dá)到完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解的患者Sokal評分明

3、顯偏?。≒=0.032）。早期尼洛替尼轉(zhuǎn)化組的患者中3個月時BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本水平小于10％的共有5例（71.4%），而晚期尼洛替尼轉(zhuǎn)化組有6例（37.5%）。尼洛替尼組達(dá)到主要分子學(xué)緩解的患者有9例，而伊馬替尼組主要分子學(xué)緩解有2例，其比例顯著高于伊馬替尼組（P=0.046）。
　　結(jié)論：尼洛替尼可使伊馬替尼療效欠佳的CML患者達(dá)到更好的療效，因此需要及時對伊馬替尼療效欠佳的CML患者進(jìn)行評估后及時更換為尼洛替尼等二代酪氨酸激

4、酶抑制劑。
　　第二部分：
　　背景：凝血因子V在抗凝系統(tǒng)及凝血系統(tǒng)中均有顯著功能，而凝血因子V缺乏癥為一種罕見的疾病，其臨床表現(xiàn)則表現(xiàn)為不同程度的出血等。
　　目的：就一個凝血因子V缺乏癥的患者及其雙親進(jìn)行凝血功能及凝血因子V功能的檢測，明確其病變程度，并通過基因突變等檢測手段對其發(fā)病的分子機(jī)制進(jìn)行討論。
　　方法：對1例凝血因子V（coagulation factor V，F(xiàn)V）缺乏患者進(jìn)行基因分析，通過PC

5、R法擴(kuò)增FⅤ基因的25個外顯子及其側(cè)翼序列，DNA測序并與Gene bank校對，鑒定導(dǎo)致凝血因子V因子缺乏的基因突變。通過設(shè)計突變點特異性引物，使用PCR法進(jìn)行定點突變，構(gòu)建FV突變質(zhì)粒后經(jīng)過DNA測序驗證并提取突變質(zhì)粒，使用脂質(zhì)體進(jìn)行COS-7細(xì)胞株內(nèi)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞上清液進(jìn)行濃縮后分別使用凝固法測定FV：C及ELISA方法測定FV：Ag，從而進(jìn)行功能驗證。
　　結(jié)果：患者基因序列分析后得到純合突變：G1538A及C4189T

6、，及雜合突變1例，突變?yōu)榻K止密碼子。通過定點突變后建立突變質(zhì)粒，測序驗證后成功將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入COS-7細(xì)胞，收集上清液濃縮后通過凝固法測得野生型活性為2.7，突變型 G1538A活性測定為2.5，突變型 C4189T活性測定為2.4，共同突變型G1538A/C4189T活性測定為2.3；ELISA方法中野生型濃度為6.53ng/ml，突變型G1538A濃度為5.04ng/ml，突變型C4189T濃度為5.61ng/ml，共同突變型G153