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1、本研究利用dsRNA技術(shù),從平菇天達300菌絲體中提取出平菇dsRNA病毒的基因組,共有4個片段,大小分別為8.2kb,2.6kbp,2.0kbp,1.1kbp(根據(jù)BioCaptMW軟件計算);酶切驗證4個片段均為dsRNA,其中8kbp為doublet。 利用一步RT-PCR對dsRNA病毒的部分基因組進行了克隆、測序,從8.2kb、2.6kb中擴增出的目的片段,大小分別為為556bp和351bp,經(jīng)過blast、保守序列比
2、對分析,來自2.6kp的556bp序列與Pleurotus ostreatus virus,(PoV I)編碼的RdRp基因有很高的相似性,核苷酸的相似性為86%,翻譯為蛋白質(zhì)的相似性為94%,其中10個不同的氨基酸中有9個不在RdRp保守區(qū)域內(nèi),只有一個在V保守區(qū)。在這10個氨基酸中,有7個是保守替代殘基。因此2.6kb序列編碼RdRp與雙分體基因組分病毒科(Partitiviridae)的成員相似,提取的dsRNA病毒可能屬于雙分體
3、基因組病毒科(Partitiviridae)。 通過CsCl梯度離心,提取到兩種大小、形狀不同的病毒顆粒:直徑為27~28nm,形狀為等軸狀;直徑為22~24nm,形狀為球形顆粒。平菇直徑22~24nm球形顆粒病毒屬首次報道。 采用高溫33℃培養(yǎng)重復(fù)切取尖端菌絲的方法對平菇天達300進行脫毒,結(jié)果表明,脫毒菌株日平均生長速度是出發(fā)菌株的1.2倍,搖瓶培養(yǎng)菌絲生物量顯著提高,是出發(fā)菌株的2.8倍。脫毒菌株第一茬菇產(chǎn)量與出發(fā)
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