綠鰭馬面鲀性類固醇激素受體在生殖周期中的表達(dá)機(jī)制.pdf

1、綠鰭馬面鲀(Navodon septentrionalis)是我國的重要經(jīng)濟(jì)魚類,本研究以煙臺(tái)百佳水產(chǎn)公司人工養(yǎng)殖的綠鰭馬面鲀?yōu)檠芯繉ο?對其進(jìn)行為期一年的周期采樣。運(yùn)用免疫組織化學(xué)和性類固醇激素放射免疫測定法,對綠鰭馬面鲀的性腺和血清性類固醇激素進(jìn)行了深入研究和分析,并采用分子生物學(xué)方法對綠鰭馬面鲀性類固醇激素受體進(jìn)行了基因克隆與表達(dá)分析,得出結(jié)果與結(jié)論如下:
　　1.綠鰭馬面鲀性腺的免疫組織化學(xué)觀察
　　對綠鰭馬面鲀進(jìn)行

2、為期一年的隔月采樣。對綠鰭馬面鲀性腺中雌激素受體α(ERα)和雄激素受體(AR)進(jìn)行了定位,發(fā)現(xiàn)在卵巢、精巢發(fā)育的不同階段均存在兩種受體的不同程度的表達(dá)。在卵巢中,ERα在卵母細(xì)胞早期發(fā)育階段呈強(qiáng)的免疫陽性反應(yīng),而隨著卵母細(xì)胞的成熟,AR免疫反應(yīng)逐漸增強(qiáng),這都說明雌激素及其受體對卵巢發(fā)育早期階段起著關(guān)鍵作用,但雄激素及其受體對卵巢的作用機(jī)制尚不明確;精巢中的ERα和AR在精子發(fā)生各個(gè)時(shí)期的間質(zhì)細(xì)胞處均有強(qiáng)陽性反應(yīng),在生殖細(xì)胞處ERα較A

3、R有更高水平的表達(dá),這說明雌激素及其受體對精巢的發(fā)育成熟起到關(guān)鍵作用,雄激素及其受體對生殖細(xì)胞的發(fā)育、成熟和維持也起著重要作用。
　　2.綠鰭馬面鲀ERs基因的克隆與時(shí)空表達(dá)分析
　　本實(shí)驗(yàn)首次克隆到綠鰭馬面鲀?nèi)NERs基因:ERα cDNA核心序列共1410bp,編碼470個(gè)氨基酸;ERβ1 cDNA全長2192bp,包含一個(gè)開放閱讀框,編碼565個(gè)氨基酸;ERβ2 cDNA全長2363bp,包含一個(gè)開放閱讀框,可以編碼6

4、62個(gè)氨基酸。利用生物學(xué)軟件將綠鰭馬面鲀ERs的氨基酸序列與其它硬骨魚類及哺乳動(dòng)物等進(jìn)行多序列比對,發(fā)現(xiàn)了ERs的一些共有的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),也發(fā)現(xiàn)了綠鰭馬面鲀ERs的一些特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR方法,檢測了ERs在性成熟雌、雄魚中11種組織中的分布情況,結(jié)果表明,綠鰭馬面鲀ERs在雌魚各組織中較雄魚的表達(dá)更廣泛,包括一些非生殖組織,如鰓、腎臟和脾臟等都檢測到mRNA表達(dá),特別是綠鰭馬面鲀ERβ1只在雄魚性腺組織中檢測到表達(dá),其他組織均未檢

5、測到表達(dá)信號。此外,結(jié)合血清E2、T及GSI的周年變化,對ERs在性腺中的周年表達(dá)情況進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)綠鰭馬面鲀ERs與血清E2和GSI都呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性,這表明E2和ERs可能影響性腺的發(fā)育成熟。
　　3.綠鰭馬面鲀AR基因的克隆與時(shí)空表達(dá)分析
　　本實(shí)驗(yàn)首次克隆到綠鰭馬面鲀AR部分基因序列,得到AR cDNA核心序列共769bp,共編碼256個(gè)氨基酸。利用生物學(xué)軟件將該片段推導(dǎo)得到的氨基酸序列與其它硬骨魚類及哺乳動(dòng)物等