類(lèi)固醇激素合成酶及相關(guān)受體表達(dá)與豬卵泡閉鎖過(guò)程的關(guān)系研究.pdf

1、卵泡發(fā)育過(guò)程中伴隨著大量卵泡的退化，卵泡在到達(dá)排卵之前所發(fā)生的退化過(guò)程即卵泡閉鎖（atresia）。卵泡閉鎖是卵泡形成以后生殖細(xì)胞退化的主要方式，在所有的脊椎動(dòng)物中都發(fā)現(xiàn)了卵泡閉鎖現(xiàn)象，而且絕大多數(shù)卵泡都以閉鎖的方式消失了。卵泡閉鎖是多因素參與的復(fù)雜調(diào)控過(guò)程，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)了某些因子的調(diào)控作用，但卵泡閉鎖的機(jī)制仍有待于進(jìn)一步的研究，其對(duì)控制人類(lèi)生育、提高輔助生殖助孕技術(shù)的妊娠率、提高家畜繁殖率、闡明某些與排卵障礙有關(guān)疾病的機(jī)理都具有重要

2、指導(dǎo)意義。本研究選用3-5mm直徑的豬卵泡，首先通過(guò)外觀判定，卵泡腔顆粒細(xì)胞計(jì)數(shù)以及卵泡液中孕酮、雌二醇比例的測(cè)定三種方法對(duì)其閉鎖程度進(jìn)行分類(lèi)；然后檢測(cè)了健康和早、晚期閉鎖卵泡中一系列類(lèi)固醇合成酶基因以及相關(guān)激素受體基因表達(dá)量的變化，分析了這些基因表達(dá)量彼此間，及其與卵泡生理指標(biāo)變化間的相關(guān)性，分析了類(lèi)固醇合成酶系統(tǒng)在有腔卵泡閉鎖中的調(diào)控作用。研究結(jié)果如下：
　　 1、建立了判斷豬卵泡閉鎖程度的統(tǒng)一方法。
　　 本研究通

3、過(guò)“外觀判斷+顆粒細(xì)胞密度+孕激素/雌激素比例”三個(gè)指標(biāo)綜合檢測(cè)和判定分別處于健康、早期閉鎖和晚期閉鎖三階段的卵泡。具體判斷標(biāo)準(zhǔn)包括：1）外觀標(biāo)準(zhǔn)：健康的卵泡呈清澈粉紅色，卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體清晰可見(jiàn)，顆粒細(xì)胞層完整；早期閉鎖卵泡呈較渾濁的暗橘黃色，卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體難以辨認(rèn)，顆粒細(xì)胞層有破皺和部分脫落；晚期閉鎖的卵泡呈淺渾濁的灰色，卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體脫落，顆粒細(xì)胞層嚴(yán)重脫落并沉積。2）顆粒細(xì)胞密度標(biāo)準(zhǔn)：健康組密度<2500個(gè)/μL；早期

4、閉鎖組密度在2500-10000個(gè)/μL間；晚期閉鎖組密度>10000個(gè)/μL。3）激素比例標(biāo)準(zhǔn)：健康組P4/E2<5；早期閉鎖組520。
　　 2、檢測(cè)了豬卵泡閉鎖過(guò)程中類(lèi)固醇激素合成酶及相關(guān)受體的基因表達(dá)量變化。
　　 本實(shí)驗(yàn)提取了健康、早期閉鎖和晚期閉鎖三階段豬卵泡總RNA，利用Real TimeRT-PCR對(duì)STAR、CYP11、CYP17、HSD3β、CYP19、FSH

5、R、LHCGR、AR和PGR共9個(gè)基因的表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè)：1）STAR在健康組中表達(dá)量較高，隨著閉鎖程度加深逐漸降低；2）CYP11在健康組中表達(dá)量較低，隨著閉鎖程度加深逐漸升高，健康、早期閉鎖兩組與晚期閉鎖組間差異顯著；3）CYP17在健康組中表達(dá)量較高，隨著閉鎖程度加深逐漸降低；4）HSD3B在健康組中表達(dá)量較低，早期閉鎖組中小幅下降，晚期閉組中升高；5）CYP19在健康組中表達(dá)量較高，隨著閉鎖程度加深逐漸降低，健康組與早、晚期兩組

6、閉鎖的卵泡間差異顯著；6）FSHR在健康組表達(dá)量較高，早期閉鎖組驟降，晚期閉鎖組有少量升高，健康組與早、晚期閉鎖兩組卵泡間差異顯署；7）LHCGR在健康組中表達(dá)量較高，早期閉鎖組降低，在晚期閉鎖組有所升高；8）PGR在健康組中表達(dá)量較低，早期閉鎖組有所下降，晚期閉鎖組中忽然升高，健康、早期閉鎖與晚期閉鎖組間差異顯著；9）AR在健康組中表達(dá)量較低，隨著閉鎖加深逐漸升高，健康、早期閉鎖兩組與晚期閉鎖組間差異顯著。
　　 3、闡明了豬

7、卵泡閉鎖過(guò)程中卵泡生理指標(biāo)、類(lèi)固醇激素合成酶及相關(guān)受體表達(dá)量間的相關(guān)關(guān)系。
　　 顆粒細(xì)胞密度與P、E含量比值的相關(guān)系數(shù)為0.438，呈顯著正相關(guān)；與CYP19表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)為-0.461，呈顯著負(fù)相關(guān)；與CYP11的相關(guān)系數(shù)為0.690，呈極顯著正相關(guān)。P含量與CYP11相關(guān)系數(shù)為0.467，呈了極顯著正相關(guān)；與HSD3B的相關(guān)系數(shù)為0.539，呈極顯著正相關(guān)；與FSHR的相關(guān)系數(shù)為-0.385，呈顯著負(fù)相關(guān)；與PGR的相關(guān)

8、系數(shù)為0.368，呈顯著正相關(guān)；P含量與其他基因表達(dá)量無(wú)顯著相關(guān)性。E含量與STAR表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)為0.456，呈顯著正相關(guān)；與CYP19的相關(guān)系數(shù)為0.446，呈顯著正相關(guān)；與LHR的相關(guān)系數(shù)為0.684，呈極顯著正相關(guān)；E與其他基因無(wú)顯著相關(guān)性。STAR與LHR的相關(guān)系數(shù)為0.575，呈極顯著正相關(guān)；CYP11與HSD3B的相關(guān)系數(shù)為0.386，呈顯著正相關(guān)；與PGR的相關(guān)系數(shù)為0.525，呈極顯著正相關(guān)：與AR的相關(guān)系數(shù)為0.3

9、69，呈顯著正相關(guān)；HSD3B與PGR的相關(guān)系數(shù)、為0.706，呈極顯著正相關(guān)；CYP19與FSHR的相關(guān)系數(shù)為0.361，呈顯著正相關(guān)；與LHR的相關(guān)系數(shù)為0.434，呈顯著正相關(guān)；AR與PGR的相關(guān)系數(shù)為0.575，呈極顯著正相關(guān)；其他基因表達(dá)量間無(wú)顯著相關(guān)性。
　　 4、分析了卵泡閉鎖幾種判定指標(biāo)間的一致性
　　 外觀判斷的指標(biāo)與顆粒細(xì)胞密度指標(biāo)間有高度一致性；單一的雌二醇含量指標(biāo)與卵泡外觀判斷的結(jié)果有顯著相關(guān)性；