牛源大腸桿菌16S rRNA甲基化酶基因的檢測及擴散機制的研究.pdf

1、氨基糖苷類抗生素是對細菌抗菌活性較好的一類廣譜、高效的抗生素，然而該類抗生素在臨床應用的普遍性，其耐藥新機制——16S rRNA甲基化酶的出現(xiàn)，導致在臨床現(xiàn)象中耐藥菌株出現(xiàn)增多，耐藥率也越來越高，并且還出現(xiàn)了多重耐藥菌的β-內(nèi)酰胺類和喹諾酮類抗菌藥物耐藥性同時存在現(xiàn)象，使得在臨床中對氨基糖苷類類抗生素的應用造成了極其嚴重的影響，因而研究寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌16S rRNA甲基化酶的擴散機制，不僅對臨床合理用藥具有指導意義，而且有利于降低

2、和控制耐藥大腸桿菌的擴散。
　　本研究主要材料是采集寧夏地區(qū)部分奶牛場的乳房炎乳樣及犢牛腹瀉糞便樣，采用革蘭氏染色鏡檢、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基以及PCR擴增16S rDNA基因等方法進行大腸桿菌的分離鑒定，再根據(jù)CLSI標準委員會推薦的肉湯微量稀釋法測定16種藥物對245株大腸桿菌分離株的MIC值，并采用藥敏紙片法進行ESBLs的表型確證試驗。結果顯示，共分離鑒定出245株牛源大腸桿菌，分離率為19.48％;藥敏試驗結果顯示，245株

3、牛源大腸桿菌對氨芐西林的耐藥率最高，達到51.84％，其次是鏈霉素(37.96％)、多西環(huán)素(36.33％)、四環(huán)素(35.51％)以及頭孢唑林(30.20％)。對多粘菌素、氟苯尼考、氨基糖苷類、頭孢類及喹諾酮類抗菌藥物則相對比較敏感，敏感率都在60％以上。較多的菌株都表現(xiàn)為對16種抗菌藥物的耐藥。經(jīng)過ESBLs表型確證試驗確定，245株牛源大腸桿菌中檢出60株ESBLs菌株，檢出率為24.49％(60/245)。
　　運用PCR

4、方法對分離出的245株牛源大腸桿菌進行16S rRNA甲基化酶基因及ESBLs基因的檢測，結果顯示，16S rRNA甲基化酶基因只檢測出rmtB基因，檢出率為5.3％(13/245); ESBLs基因blaTEM、bla CTX-M、blaOXA的檢出率分別為23.27％(57/245)、11.02％(27/245)、2.86％(7/245);檢出的13株rmtB陽性大腸桿菌中還檢出了blaTEM-1、blaCTX-M基因，并檢出了2株

5、blaOXA-1基因，檢出率分別為100.0％(13/13)，100.0％(13/13)和15.38％(2/13)。
　　最后采用PFGE分子分型試驗、接合轉移試驗和Southern雜交等方法研究16S rRNA甲基化酶基因的擴散機制。試驗數(shù)據(jù)顯示，寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌中rmtB基因的擴散方式主要通過垂直和水平傳播兩種方式擴散。
　　綜上所述，本研究通過對寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌耐藥性分析及16S rRNA甲基化酶基因擴散機制的