雞奇異變形桿菌和沙門菌16SrRNA甲基化酶基因的檢測(cè)及擴(kuò)散機(jī)制.pdf

1、質(zhì)粒介導(dǎo)的16S rRNA甲基化酶是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種耐藥決定因子,可導(dǎo)致革蘭氏陰性細(xì)菌對(duì)4,6-二取代基-脫氧鏈霉胺類氨基糖苷類藥物(如慶大霉素、阿米卡星等)高水平耐藥。因此,深入了解16s rRNA甲基化酶基因在規(guī)?；u場(chǎng)腸桿菌科細(xì)菌的流行狀況及擴(kuò)散機(jī)制,在獸醫(yī)臨床抗感染治療領(lǐng)域上具有重要的實(shí)際意義。
　　 本研究自2009年5月-2010年11月從河南省4個(gè)規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)采集樣品391份(包括肛門拭子等)。經(jīng)細(xì)菌分離、培養(yǎng)、

2、API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)和PCR鑒定,共分離奇異變形桿菌20株,沙門菌21株。首先,對(duì)這些菌株進(jìn)行常用抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)。然后,在藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用PCR反應(yīng)對(duì)這些菌株進(jìn)行16S rRNA甲基化酶基因的檢測(cè),初步了解16s rRNA甲基化酶基因在這些菌株中的流行情況,并同時(shí)檢測(cè)了16s rRNA甲基化酶陽(yáng)性菌株攜帶ESBLs基因(TEM,SHV,CTX-M)和質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類藥物耐藥基因(qnr、qepA和aac(6)-ib)的情況。

3、最后,采用細(xì)菌質(zhì)粒接合試驗(yàn)(以大腸桿菌J53和EC600為受體菌)、電轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(以DH10B為受體菌)、脈沖場(chǎng)凝膠電泳試驗(yàn)等,探索研究這些耐藥菌株16S rRNA甲基化酶基因的水平和/或垂直擴(kuò)散機(jī)制。
　　 結(jié)果表明,在分離的20株奇異變形桿菌中,對(duì)常用的7種藥物均呈現(xiàn)多重耐藥,對(duì)氨基糖苷類藥物阿米卡星高水平耐藥的菌株高達(dá)100％,經(jīng)16S rRNA甲基化酶基因檢測(cè),均為rmtB基因。在分離的21株沙門菌中,對(duì)常用的7種抗菌藥物

4、大部分敏感,僅有1株對(duì)阿米卡星高度耐藥,檢測(cè)率為4.76％,經(jīng)16s rRNA甲基化酶基因檢測(cè),為armA基因。20株rmtB陽(yáng)性菌株大多攜帶CTX-M-2和CTX-M-9組超廣譜β-內(nèi)酰胺酶,其攜帶率分別為90％和35％。armA陽(yáng)性菌株還同時(shí)攜帶TEM-1型、CTX-M-2組和CTX-M-9組超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因和質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥基因qnrS、qnrB和aac(6’)-Ib-cr。
　　 對(duì)奇異變形桿菌進(jìn)行多次接合

5、試驗(yàn)和電轉(zhuǎn)化試驗(yàn)均未成功。初步提示,垂直克隆傳播,而不是水平傳播在其16S rRNA甲基化酶耐藥基因擴(kuò)散中發(fā)揮重要作用。脈沖場(chǎng)凝膠電泳的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了這種情況,提示本次分離的奇異變形桿菌不同菌株間的親緣關(guān)系密切相關(guān),可能來(lái)源于一個(gè)共同祖先。沙門菌的多次接合也未成功,其原因有待于進(jìn)一步證實(shí),但電轉(zhuǎn)化試驗(yàn)成功地獲得了電轉(zhuǎn)化菌株。初步表明,其16S rRNA甲基化酶耐藥基因annA位于質(zhì)粒上,可導(dǎo)致其水平擴(kuò)散。該質(zhì)粒還同時(shí)攜帶TEM-1

6、型、CTX-M-2組超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因以及質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥基因qnrB和aac(6’)-Ib-cr。
　　 綜上所述,本研究首次進(jìn)行了動(dòng)物源奇異變形桿菌和沙門菌16S rRNA甲基化酶基因的流行病學(xué)檢測(cè),并在此基礎(chǔ)上對(duì)其擴(kuò)散機(jī)制進(jìn)行了探索。首次分別在動(dòng)物源奇異變形桿菌和沙門菌上分別檢測(cè)到16S rRNA甲基化酶基因rmtB和armA。初步證實(shí),奇異變形桿菌16S rRNA甲基化酶基因rmtB的擴(kuò)散機(jī)制以垂直克隆擴(kuò)散為