變形桿菌檢測(cè)方法

1、變 形 桿 菌 的 檢 測(cè),,一、概 述,變形桿菌廣泛分布于水、土壤、腐敗 有機(jī)物等自然界和人與動(dòng)物腸道中，是一類(lèi)條件致病菌，引起醫(yī)院感染的常見(jiàn)條件致病菌，耐藥菌株日益增多，常引起泌尿系感染等多種感染；污染食物后易在其中繁殖，引起食物中毒。,變形桿菌食物中毒是我國(guó)最常見(jiàn)的一類(lèi)食物中毒之一，全年均可發(fā)生，多發(fā)于5月～10月，以7月～9月常見(jiàn)，主要中毒食品為含有大量變形桿菌活菌的熟肉制品和涼拌菜。 該

2、菌引起的食物中毒潛伏期較短，一般為3～4h，主要癥狀為惡心、嘔吐、腹部劇烈疼痛、腹瀉、頭疼、發(fā)熱、全身無(wú)力等。腹瀉一日數(shù)次，多為水樣便、少數(shù)粘液便，有惡臭。病程較短。,腸桿菌科： 變形桿菌類(lèi)（Proteus）變形桿菌類(lèi)： 變形桿菌屬（Proteus） 普羅菲登斯屬（Providencia） 摩根氏菌屬（Mo

3、rganella）變形桿菌屬： 普通變形桿菌（P.vulgaris） 奇異變形桿菌（P.mirabilis） 產(chǎn)粘變形桿菌（P. myxofaciens） 潘氏變形桿菌（P.permeri）,二、生物學(xué)特性（一）形態(tài)1.菌體形態(tài) 變形桿菌為革蘭陰性小桿菌，兩端鈍

4、圓。大小0.4～0.6μm×1～3μm，有明顯多形性。無(wú)莢膜。有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。有菌毛，可粘附至植物和真菌細(xì)胞表面，但不能與動(dòng)物或人類(lèi)細(xì)胞粘附。,奇異變形桿菌懸浮標(biāo)本的細(xì)胞形態(tài)，金屬鍍膜×24000 小桿菌，兩端鈍圓,普通變形桿菌為革蘭陰性桿菌，多數(shù)為單個(gè)存在，也可見(jiàn)成對(duì)或短鏈排列，周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，無(wú)莢膜。,變形桿菌周身鞭毛 運(yùn)動(dòng)活潑,,,2.培養(yǎng)特性,營(yíng)養(yǎng)要求不高，需氧及兼性厭氧。在固體培養(yǎng)基上呈擴(kuò)

5、散性生長(zhǎng)，可形成以接種部位為中心的厚薄交替、同心圓型的層層波狀菌苔，稱(chēng)為遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象。在培養(yǎng)基中加入0.1%石炭酸、0.4%硼酸或4%乙醇，或?qū)傊瑵舛仍黾又?%，則抑制鞭毛生長(zhǎng)，遷徙現(xiàn)象消失。在SS瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落為圓形，扁薄半透明，易與沙門(mén)菌菌落混淆。,擴(kuò)散性生長(zhǎng)，厚薄交替、同心圓型的層層波狀菌苔遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象,,在SS瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落為圓形，扁薄半透明，易與沙門(mén)菌菌落混淆，沒(méi)有遷徙現(xiàn)象。,（二）生化特性變形桿菌可

6、使各種氨基酸脫氨分解，不具有賴(lài)氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性，多數(shù)產(chǎn)生靛基質(zhì)并水解尿素，發(fā)酵少數(shù)糖類(lèi)，不產(chǎn)生氣體或產(chǎn)生少量氣體。變形桿菌屬的特性表現(xiàn)為甘露糖陰性，蔗糖、麥芽糖、木糖和蕈糖陽(yáng)性，明膠酶、脂酶、DNA酶陽(yáng)性，多數(shù)產(chǎn)H2S。,（三）致病性 致病物質(zhì)有腸毒素和脫羧酶。腸毒素 變形桿菌產(chǎn)生的腸毒素，其化學(xué)成分為蛋白質(zhì)和碳水化合物的復(fù)合物，具有抗原性，引起中毒性胃腸炎。脫羧酶 摩根變形桿菌可產(chǎn)

7、生具有很強(qiáng)催化作用的脫羧酶，使食品中的組氨酸脫羧產(chǎn)生組胺，導(dǎo)致人體過(guò)敏性中毒。,三、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),WS/T 9—1996,,1、樣品采集：中段尿、膿、痰、血液食物中毒標(biāo)本：可疑食物、糞便2、增菌培養(yǎng)： 樣品接種于GN肉湯，36士1℃培養(yǎng)24h。,3、分離培養(yǎng)分離平板：接種于EMB平板或SS平板，置37℃培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)特征。典型變形桿菌在EMB培養(yǎng)基上為無(wú)色透明，部分蔓延生長(zhǎng)；在SS培養(yǎng)平板上形成單個(gè)

8、菌落，有的菌落邊緣呈擴(kuò)散狀，有粘性，打開(kāi)平皿時(shí)有臭味。將可疑菌落轉(zhuǎn)種三糖鐵斜面，37℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。,,EMB培養(yǎng)基上為無(wú)色透明菌落,SS培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落，菌落中心呈黑色，有粘性，打開(kāi)平皿時(shí)有臭味,,血平板上形成無(wú)色透明菌落遷徙現(xiàn)象明顯，不溶血,4、初步鑒定 將三糖鐵培養(yǎng)基上乳糖反應(yīng)陰性、硫化氫陽(yáng)性或陰性的菌株接種尿素和苯丙氨酸鑒定培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，變形桿菌二者均為陽(yáng)性。

9、變形桿菌易與沙門(mén)氏菌混淆，但變形桿菌能夠水解尿素。,,三糖鐵結(jié)果：K/A 產(chǎn)H2S尿素分解陽(yáng)性,5、生化試驗(yàn) 經(jīng)初步鑒定符合變形桿菌特征菌株， 按表3-8-1、3-8-2、3-8-3、3-8-4中項(xiàng)目進(jìn)行生化鑒定試驗(yàn)，并判定種屬或種群。也可用API20E和全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行生化鑒定。,,奇異變形桿菌 API20E 結(jié)果,API 20E報(bào)告單 奇異變形桿菌,,6、變形桿菌菌數(shù)的測(cè)定 在變形

10、桿菌食物中毒診斷檢驗(yàn)時(shí)，需要對(duì)可疑食物進(jìn)行變形桿菌活菌計(jì)數(shù)，常采用近似計(jì)數(shù)法。 將檢樣在研缽中研磨制成懸液后，用生理鹽水對(duì)原樣品進(jìn)行10-2、10-3、10-4、10-5等稀釋度的稀釋?zhuān)謩e移取各稀釋度的懸液0.1ml接種于瓊脂斜面底部的凝結(jié)水內(nèi)，但勿接觸培養(yǎng)基斜面表面。37℃培養(yǎng)24～48 h，觀察生長(zhǎng)狀況。變形桿菌可自下而上彌漫生長(zhǎng)，以出現(xiàn)生長(zhǎng)的最高稀釋度乘以10，則為每克檢樣中變形桿菌的最近似數(shù)。,7、血清學(xué)實(shí)

11、驗(yàn) 在食物中毒診斷和判定中，需要對(duì)來(lái)自可疑食物與患者的菌株進(jìn)行血清型別鑒定，以判定其同源性，如果沒(méi)有分型因子血清，可做患者血清效價(jià)和交互吸收試驗(yàn)。如果這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)不能做，至少應(yīng)該將待試菌株分別點(diǎn)種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板的兩端，待兩側(cè)的菌株蔓延生長(zhǎng)到平板中間，菌苔完全融合，說(shuō)明兩株細(xì)菌沒(méi)有拮抗現(xiàn)象。 8、動(dòng)物試驗(yàn) 檢樣中分離純化出的變形桿菌培養(yǎng)物，分別飼喂小白鼠或豚鼠、家兔等供試動(dòng)物