五種變形桿菌O抗原的遺傳基礎(chǔ)研究及特異基因的鑒定.pdf

1、變形桿菌(Proteus)是革蘭氏陰性細菌,屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)。它在自然界分布極廣,是一種條件致病菌,能引起如食物中毒、尿路感染、夏季腹瀉或其他混合感染等疾病。
　　 對于變形桿菌,目前只有O10進行了全基因組測序,其O抗原基因簇的研究還處于空白階段。本實驗室前期通過限制性酶切片段長度多態(tài)性分析,證明變形桿菌的O抗原基因簇位于cpxA基因和secB基因之間。在此基礎(chǔ)上,本論文完成了變形桿菌05、

2、034、041、048和049這五種血清型O抗原基因簇的測序和分析。首先通過位于cpxA基因和secB基因內(nèi)的引物進行長PCR擴增,然后利用該PCR產(chǎn)物構(gòu)建shotgun文庫,篩選陽性克隆進行序列測定,在獲得完整序列的基礎(chǔ)上,進行生物信息學(xué)分析,預(yù)測基因功能。
　　 對這五株變形桿菌的O抗原基因簇分析后,我們發(fā)現(xiàn):cpxA基因和secB基因之間的基因,多數(shù)轉(zhuǎn)錄方向為5’-3’,個別基因由3’-5’方向轉(zhuǎn)錄；O抗原基因簇的(G+C

3、)含量在24％-28％之間,相對其基因組的(G+C)含量偏低；含有單糖合成酶基因、寡糖單位處理酶基因和糖基轉(zhuǎn)移酶基因；O抗原合成均為典型的Wzy-依賴型合成途徑；基因簇中多含有負責(zé)UDP-D-GlcA或UDP-D-GalA合成的基因,與其O抗原結(jié)構(gòu)中多含有UDP-D-GlcA或UDP-D-GalA相符；與大腸桿菌相比,罕見單糖合成基因和糖基轉(zhuǎn)移酶基因并非均位于該區(qū)域內(nèi),而該區(qū)域內(nèi)的一些基因也并非O抗原合成所需,因此推測,該區(qū)域的部分基因