無(wú)遷徙生長(zhǎng)碳青霉烯耐藥奇異變形桿菌生物學(xué)特性、耐藥機(jī)制及分子分型研究.pdf

1、目的:探討無(wú)遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象碳青酶稀耐藥奇異變形桿菌生物學(xué)特性、耐藥機(jī)制及分子分型特點(diǎn)，為院內(nèi)感染防控提供指導(dǎo)。此外，通過(guò)比較遷徙生長(zhǎng)奇異變形桿菌與無(wú)遷徙生長(zhǎng)奇異變形桿菌耐藥譜差異，為臨床針對(duì)該類(lèi)細(xì)菌抗感染治療提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:回顧分析2013年1月至2014年12月武警杭州醫(yī)院臨床分離的奇異變形桿菌耐藥率;收集其中碳青霉烯類(lèi)耐藥無(wú)遷徙奇異變形桿菌，菌株經(jīng)過(guò)多次傳代并觀察有無(wú)遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象，通過(guò)半固體培養(yǎng)及鞭毛染色實(shí)驗(yàn)觀察菌株動(dòng)

2、力及鞭毛;利用脈沖凝膠電泳PFGE(Pulsed-field gel electrophoresis)分析菌株之間同源性;采用瓊脂稀釋法及E-test法進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)用ESBLs雙紙片實(shí)驗(yàn)和改良Hodge實(shí)驗(yàn)進(jìn)行表型確證，表型實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性菌株采用PCR方法和測(cè)序分析明確耐藥基因型。運(yùn)用S1-PFGE聯(lián)合Southern印跡雜交及質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化試驗(yàn)對(duì)碳青霉烯耐藥基因進(jìn)行定位，并分析耐藥基因周?chē)h(huán)境。最后對(duì)電轉(zhuǎn)子進(jìn)行目標(biāo)基因擴(kuò)增和藥敏驗(yàn)

3、證。
　　結(jié)果:無(wú)遷徙生長(zhǎng)奇異變形桿菌生物學(xué)特性:通過(guò)比較菌體鞭毛染色發(fā)現(xiàn)，鏡下無(wú)遷徙菌株菌體小且規(guī)則并明顯缺失鞭毛結(jié)構(gòu);在半固體穿刺培養(yǎng)中只能沿穿刺線(xiàn)生長(zhǎng)，不能沿線(xiàn)外蔓延擴(kuò)散，推測(cè)可能由于無(wú)遷徙菌株，鞭毛結(jié)構(gòu)缺失而失去遷徙生長(zhǎng)的能力。兩種奇異變形桿菌生化特性相同。在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況提示，在含有膽鹽的麥康凱、SS平板上，兩種奇異變形桿菌均不能形成遷徙生長(zhǎng)的菌落，群集運(yùn)動(dòng)消失。
　　本次研究共統(tǒng)計(jì)奇異變形桿菌339株，其中

4、無(wú)遷徙細(xì)菌42株;遷徙菌對(duì)亞胺培南與美羅培南耐藥率分別為6.3％與3.2％，無(wú)遷徙菌耐藥率分別為57.2％與52.4％，兩種形態(tài)菌株對(duì)碳青霉烯耐藥率具有顯著差異;42株無(wú)遷徒奇異變形桿菌中，碳青霉烯類(lèi)耐藥的奇異變形桿菌為24株，占57％。對(duì)該24株碳青霉烯類(lèi)耐藥無(wú)遷徙生長(zhǎng)奇異變形桿菌進(jìn)行PFGE同源性分析，結(jié)果提示分為3個(gè)克隆型，以克隆A型（22/24株）流行為主，所有菌株改良Hodge實(shí)驗(yàn)均為陽(yáng)性，且均攜帶blaKPC-2基因，菌株動(dòng)

5、力實(shí)驗(yàn)及鞭毛染色均為陰性;Southern印跡雜交表明blaKPC-2基因分別定位在約為(26kb，55kb，139kb)不同大小質(zhì)粒上;部分菌株在攜帶blaKPC-2基因的質(zhì)粒上同時(shí)攜帶blaTEM-1、 blaCTx-M-65、 rmtB等多種耐藥基因;攜帶blaKPC-2基因菌株周?chē)Y(jié)構(gòu)顯示，其上游含有插入元件ISKpn8，下游則由插入元件ISKpn6-like構(gòu)成，該結(jié)構(gòu)易導(dǎo)致耐藥基因在種屬間水平傳播。臨床資料回顧發(fā)現(xiàn)，該類(lèi)細(xì)菌